厌氧微生物培养技术的目的和原理

厌氧微生物培养技术的目的和原理厌氧微生物培养技术的目的和原理关键词：焦性没食子酸碳酸氢钠柠檬酸氯化锌亚甲蓝氮气标准气体标准溶液北京标准物质网对简单，可用于那些对厌氧要求相对较低的一般厌氧菌的培养，如碱性焦性没食子酸法、厌氧罐培养法、庖肉培养基法等。本实验将主要介绍这三种，它们都属于最基本也是最常用的厌氧微生物培养技术。其中有些厌氧微生物要求高的培养研究，对实验仪器也有较高的要求，如主要用于严格厌氧菌分离和培养的亨盖特技术、厌氧培养箱(手套箱)法等。厌氧培养箱已逐渐普及，本实验也作简要介绍。1．碱性焦性没食子酸法焦性没食子酸与碱溶液(NaOH、Na2CO3或NaHCO3)作用后形成易被氧化的碱性没食子盐，能通过氧化作用而形成黑、褐色的焦性没食子橙从而除掉密封容器中的氧。这种方法的优点是无需特殊及昂贵的设备，操作简单，适用于任何可密封的容器，可迅速建立厌氧环境，适用于前期实验性探索研究；而其缺点是在氧化过程中会产生少量的一氧化碳，对某些厌氧菌的生长有抑制作用，同时，NaOH的存在会吸收掉密闭容器中的二氧化碳，对某些厌氧菌的生长不利。用NaHCO3。代替NaOH，可部分克服二氧化碳被吸收问题，但却又会导致吸氧速率的降低。当然，大批量厌氧培养需消耗大量实验药品，并产生大量废液，可能引起环境污染。2．厌氧罐培养法利用一定方法在密闭的厌氧罐中生成一定量的氢气，而经过处理的钯或铂可作为催化剂催化氢与氧化合形成水，从而除掉罐中的氧而造成厌氧环境。由于适量的CO2(2％～10％)对大多数的厌氧菌的生长有促进作用，在进行厌氧菌的分离时可提高检Ⅲ率，所以一般在供氢的同时还向罐内供给一定的CO2。厌氧罐中H2及CO2的生成可采用钢瓶灌注的外源法，但更方便的是利用各种化学反应在罐中自行生成的内源法，例如，镁与氯化锌遇水后发生反应产生氢气，碳酸氢钠加柠檬酸水后产生CO2：Mg+ZnCl2+2H2O→MgCl2+Zn(OH)2+H2↑C6H8O7+3NaHCO3→Na3(C6H5O7)+3H2O+3CO2↑厌氧罐中使用的厌氧度指示剂一般都是根据亚甲蓝(methyleneblue)在氧化态时呈蓝色而在还原态时呈无色的原理设计的。目前，厌氧罐技术早已商业化，有多种品牌的厌氧罐产品(厌氧罐罐体，催化剂、气体发生袋、厌氧指示剂)可供选择。它实际上已经同厌氧培养箱类似，但因为体积小、携带方便，使用起来