利用LIVE_DEAD Baclight 染色测定活性污泥中的活菌水平

利用LIVE_DEAD Baclight 染色测定活性污泥中的活菌水平第26卷�第5期2007年��9月环�境�化�学ENVIRONMENTALCHEMISTRYVo.l26,No.5September2007�2006年10月30日收稿.�*高等学校博士学科点专项科研基金(20020003041)资助项目.**通讯联系人,E�mai:lxhuang@tsinghua�edu�cn利用LIVE/DEADBaclight染色测定活性污泥中的活菌水平*梁�鹏�黄�霞**(清华大学环境科学与工程系,环境模拟与污染控制国家重点联合实验室,北京,100084)摘�要�以LIVE/DEADBaclight染色法测定活性污泥中的活菌水平,采用荧光染色剂SYTO9和碘化丙啶(PI)对活性污泥进行染色,并利用荧光分光光度计测量绿色荧光(Fg,波长500�510nm)光强来表征活性污泥中活菌水平.该法直接对稀释后的污泥悬浊液进行测量,简化了测量步骤.当污泥浓度小于100mg�l-1时,每毫升样品需投加染色剂25�;l污泥浓度稀释到50mg�l-1,其惰性颗粒物对测量产生的影响在7%以下;超声波分散的最佳条件是:超声时间2min,功率40W.关键词�活性污泥,Baclight染色法,活菌.��环境微生物中活菌测定的传统方法是通过对样品中的活菌培养后计数.由于部分微生物可培养性差(传统培养技术能分离培养的微生物只占环境微生物的0�1%�1%[1]),所测定的结果仅仅是可以培养的细菌.目前较为常见的活菌检测方法主要基于活菌代谢特性(脱氢酶、醌、ATP、CTC染色等[2])和活菌特定组成结构(磷脂、PCR以及其它活菌染色技术[3]).由于活性污泥中含有不同种类的细菌,不同活菌的代谢能力可能不同,表征其代谢强度的脱氢酶和醌、ATP的含量也可能不同,所以通过细菌代谢能力不能准确地确定活性污泥中活菌水平.��LIVE/DEADBaclight染色原理是利用荧光染色剂与细胞核酸结合,使核酸在蓝光的激发下发射荧光,通过测定发射荧光的强度确定样品中活菌水平.所用核酸染色剂为SYTO9和PI(碘化丙啶)与其它活菌检测方法相比,LIVE/DEADBaclight染色法前处理简单,可使待测样品中的微生物基本保持原环境中的状态,测定时间短,在几分钟之内分辨出活菌和死菌,并可通过定量分析检测出活菌比例,且不受细菌种