利用PCR_DGGE技术鉴定氯酚降解菌株_尹艳华

文章编号:1005-0930(2011)02-0196-008　　中图分类号:X52　　文献标识码:Adoi:10.3969/j.issn.1005-0930.2011.02.003　收稿日期:2010-05-11;修订日期:2010-11-08作者简介:尹艳华(1968—),女,高级工程师.Tel:010-68918978;E-mail:yinyh@bit.edu.cn利用PCR-DGGE技术鉴定氯酚降解菌株尹艳华,　胡学敏,　陈沙沙(北京理工大学化工与环境学院,生态工业研究所,北京100081)摘要:为鉴定好氧厌氧固载工艺降解2,4-DCP和2,4,6-TCP优势菌株,分析2,4-DCP和2,4,6-TCP降解机理,取连续运行60d的厌氧好氧反应器出入口微生物,利用PCR-DGGE技术,分析菌株DNA电泳结果,研究16SrDNAV3可变区的PCR产物.通过DGGE图谱聚类、测序等技术,与NCBI数据库中的基因序列相匹配,结果表明:反应器中有4种优势菌株:埃希氏菌属、梭状芽孢杆菌属、肠杆菌属和洋葱伯克霍尔德氏菌属,且均以厌氧和兼性厌氧为主.推测厌氧好氧联合固载技术降解2,4-DCP和2,4,6-TCP的方式以厌氧脱氯为主,在4种优势菌株的联合作用下,从单氧酶和氧化还原酶催化开始降解,2,4,6-TCP被单氧酶氧化成2,6-二氯对苯醌,然后化学还原成2,6-二氯-对苯二酚,最后,变成6-氯-2-羟基-对苯醌,最后继续分解为小分子、CO2和水,实现全面降解.关键词:氯酚;混合菌种;PCR-DGGE氯酚类化合物属于毒性高难降解持久性污染物,被广泛用作杀虫剂、除草剂和木材防腐剂等,在环境中大量累积,对生态环境和人类健康造成了很大危害,被美国环保局列入“优先控制污染物”黑名单[1].到目前为止,已发现并分离出多种对氯酚类芳香化合物具有代谢能力的微生物[2-4],例如Burkholderiacepacia(Ps.cepacia),Ps.Pickettii,Clostridiumsp.,Phanerochatechrysosporium,Azotobactersp.,Desulfitobacteriumdehalogenans和Desulfomoniletiedjei等,这些研究成果为今后研究降解氯酚类芳香化合物的高效菌株指引了方向.目前,随着分子生物学技术的发展,基于16S