噬菌体展示在微生物学研究中的应用

噬菌体展示在微生物学研究中的应用噬菌体展示技术及其应用噬菌体展示技术及其应用潘卫潘卫第二军医大学微生物学教研室第二军医大学微生物学教研室上海200433上海200433一、噬菌体展示定义一、噬菌体展示定义1985年GeorgeSmithP.将内切酶将内切酶EcoRI基因片段基因片段416~547位，位，548~718位插入丝状噬菌体位插入丝状噬菌体F1编码噬菌体的结构蛋白编码噬菌体的结构蛋白III（PIII）基因中，从而产生了一种重组噬菌体。）基因中，从而产生了一种重组噬菌体。结构蛋白结构蛋白III中融合有中融合有EcoRI内切酶部分序列，噬菌体保留其感染性，内切酶部分序列，噬菌体保留其感染性，EcoRI抗体结合活性，内切酶基因成为为噬菌体基因组的一部分进行遗传和变异抗体结合活性，内切酶基因成为为噬菌体基因组的一部分进行遗传和变异二、噬菌体展示的特点二、噬菌体展示的特点转基因噬菌体分子形式滴度高转基因噬菌体分子形式滴度高噬菌体具有繁殖速度快、个体小、以溶液形式存在、在单位体积中的个体数多等特点，噬菌体具有繁殖速度快、个体小、以溶液形式存在、在单位体积中的个体数多等特点，使得用化学的方式研究生命个体成为可能。使得用化学的方式研究生命个体成为可能。三三、丝状噬菌体的生物学三、丝状噬菌体的生物学形态：长杆状，长度约形态：长杆状，长度约1um，管直径约，管直径约6nm。基因组：约基因组：约6400核苷酸大小的单链线状核苷酸大小的单链线状DNA，结构：●结构：●2700个主要蛋白（个主要蛋白（PVIII）分子螺旋状排列形成长管，●一头）分子螺旋状排列形成长管，●一头5个拷贝的次要壳蛋白个拷贝的次要壳蛋白PIII和PVI，●另一头则由次要壳蛋白，●另一头则由次要壳蛋白PVII和PIX。生理：●生理：●F菌毛结合的序列是菌毛结合的序列是PIII蛋白蛋白N端的端的200个氨基酸。●一个分裂周期中可生产几百个子代，●其产量可达到个氨基酸。●一个分裂周期中可生产几百个子代，●其产量可达到0.3mg/ml。四、外源蛋白的展示部位四、外源蛋白的展示部位五、外源蛋白的展示方式五、外源蛋白的展示方式六、噬菌体展示技术所展示外源多肽和及文库六、噬菌体展示技术所展示外源多肽和及文库1.随机肽库随机肽库�随机肽库通常较短（随机肽库通常较短（4~36氨基酸氨基酸[8,9]长度）长度）�编码它们的核酸由