FISH法检测生物膜中硝化细菌流程的建立及优化_张勇

注：*表示rRNA位置，相对于E.coli序列位置；**表示cNIT3为硝酸菌探针NIT3的竞争探针；***表示针的保存质量浓度为50mg·mL-1[6]表1寡核苷酸探针序列0引言用活性污泥法处理污水是当今世界上最主要的污水处理工艺之一，并已有80多年的历史，但是关于活性污泥中起主要作用的微生物群落结构与功能关系的知识仍非常有限，这也是微生物生态学家非常感兴趣的问题。长久以来，自然环境中微生物群落的多样性检测和动力学分析一直是建立在分离和培养的方法上，但此方法存在许多缺点，因此试图用直接的方法分析活性污泥中细菌群落结构的特性。最近l0年来，随着PCR、核酸测序等现代分子生物技术的发展，快速准确地鉴定细菌成为可能。其中荧光原位杂交(fluorescenceinsituhybridization，FISH)技术是应用广泛、最为有效的技术之一[1]。其基本原理是：用已知的标记单链核酸为探针,按照碱基互补的原则，与待检测的染色体或DNA切片中未知的单链核酸进行异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。最后经荧光检测系统在荧光显微镜下进行定性、定量和相对定位分析。研究通过FISH法对生物膜上的硝化细菌进行检测，优化检测方法，得到对此类检测方法的一种较好的实验条件，使其具体化、步骤化、常规化。1实验材料1.1菌种及核酸探针实验菌种及核酸梭探针见表1。FISH法检测生物膜中硝化细菌流程的建立及优化张勇，宋吟玲，史俊，陈宇（苏州科技学院环境科学与工程学院，江苏苏州215011）摘要：通过试验筛检荧光原位杂交(FISH)技术在检测反应器生物膜中硝化细菌时适合的实验条件。结果显示，FISH技术检测生物膜中硝化细菌时，较好的预处理条件和杂交条件为：样品在热固定前不需1×PBS清洗；检测生物膜中硝化细菌的实验条件：①硝酸细菌：杂交温度46℃，杂交时间5h，洗脱液中c(NaCl)为55mmol/L；②亚硝酸细菌：杂交温度46℃，杂交时间3h，洗脱液中c(NaCl)为30～40mmol/L。关键词：硝化细菌；荧光原位杂交；杂交优化中图分类号:X2文献标识码:A文章编号:1674-4829(2009)04-0034-04收稿日期：2009－05－19作者简介：张勇(1979-)，男，河南安阳人，硕士，专业方向：环境工程.EstablishmentofExperimentalConditionsan