荧光原位杂交法在活性污泥硝化细菌检测中的应用_谢冰

名声;不袖种穿2003年第22卷第5期`夕2口刀岁2厉及ZVlron刃朗细15乞z沪nc`S荧光原位杂交法在活性污泥硝化细菌检测中的应用APP1ieationofFluoreseenee加肠初Hybridization(FISH)toDeteeting谢XieBingXuHuaXuyatongNitrifyingBaeteriainAetivatedSludge冰徐华徐亚同(华东师范大学环境科学与技术系,上海2以X)62)(DePt.ofEnviornmentalSeieneeandeTehnology,EastChinaNomralnUivesriyt,ShanghiaZ《Xx拓2)摘要采用荧光原位杂交(「1SH)法对活性污泥样品中的硝化细菌进行了检测研究。与传统方法相比.F!SH法具有快速便捷的特点.可原位检测出活性污泥菌胶团上的硝化细菌的分布情况,结合稀释的方法.可对环境样品中的硝化细菌进行定t分析。此法既可定性.又可对环境中的硝化细菌进行直接计数为研究硝化细菌类群的空间和数,分布提供有效的检测工具。关键词:荧光原位杂交硝化细菌活性污泥1引言在环境样品的分析中引人分子生物学技术,使得对硝化细菌种群变化的研究成为可能l’一2,。目前通过对己分离培养得到的亚硝酸细菌的165rRNA基因的序列进行分析,发现其中亚硝化球菌属属于原核微生物的v亚类,亚硝化单胞菌属、亚硝化螺菌属和亚硝化叶菌属属于原核微生物的日亚类。基于超显微结构的描述,分类学家将硝酸细菌分为硝化杆菌属、硝化刺菌属和硝化球菌属。进一步比较它们的165:RNA基因同源序列,硝化杆菌属属于原核微生物的a亚类;硝化刺菌属和硝化球菌分别属于原核微生物y亚类和口亚类[’一7〕。此外,通过运用硝酸细菌的165rRNA特异性序列设计的探针进行定量印迹杂交和原位杂交,发现在多种硝化环境中硝化杆菌的数量只占少量,表明在硝化作用过程中,非硝化杆菌的亚硝酸盐氧化菌起着重要作用18一,}。荧光原位杂交(Fluoreseentinsituhybridiza-iton,FISH)是直接法杂交的一种,其原理是dsDNA的变性和与带有互补顺序的同源单链退火配对形成双链结构的过程。退火复性形成的可以是双链DNA或DNA/RNA异质双链分子。带有荧光标记的探针与固定在玻片或纤维膜上组织或细胞中特定的核昔酸序列进行杂交,而无需单独分离出DN