高效硝化细菌的富集培养与分离_张玲华

收稿日期:2002-03-15基金项目:广东省科技厅科技重点攻关项目作者简介:张玲华(1973-),女,浙江宁波人,硕士,助理研究员,主要从事微生物育种和发酵研究。浙江农业学报ActaAgriculturaeZhejiangensis14(6):348～350,2002　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　高效硝化细菌的富集培养与分离张玲华,邝哲师,张宝玲　(广东省农业科学院农业生物技术研究所,广东广州510640)Researchonenrichmentandisolationtechniquesforhigh-efficientnitrobacteriaZHANGLing-hua,KUANGZhe-shi,ZHANGBao-ling(Bio-techInstitute,GuangdongAcademyofAgriculturalSciences,Guangzhou510640,China)关键词:硝化细菌;亚硝化细菌;硅胶平板;富集培养;氨氮Keywords:nitrobacteria;nitritebacteria;silicagelplate;enrichmentcultivation;ammonianitrogen中图分类号:Q939.11+1　　　　　　文献标识码:A文章编号:1004-1524(2002)06-0348-03　　硝化细菌是生物硝化脱氮中起主要作用的微生物,直接影响硝化效果和生物脱氮的效率。有研究表明,污水中硝化细菌的浓度与硝化速率成正比[1],因此,提高污水中硝化细菌的浓度、获得纯种硝化细菌,可大大提高生物脱氮和污水处理的效率。而硝化细菌是一类化能自养细菌,包括亚硝化菌和硝化菌两个生理菌群,一般的种类不能在有机培养基上生长,对营养的要求专一性很强;其世代时间长,伴生的异养细菌生长速度快。所以,在实验室中对硝化细菌的富集和分离均较困难。本试验采用不同的分离方法,探寻能获得纯度较高的硝化细菌的分离方法。通过使用不同的基质对活性污泥中的硝化细菌进行富集培养,以期能分离到纯度较高、对硝化细菌有较好富集效果的细菌。现将试验结果报道如下。1　材料与方法1.1　分离材料取自某养猪场污水处理站A2/O系统外回流槽的硝化污泥。1.2　富集培养基1.2.1　硝化菌富集培养基　组成:NaCl0.3g,Mg-SO4·7H2O0.14g,FeSO4·7H2O0.03g,0.1mol/LKH2PO410ml,NaNO20.5g,NaHCO31.6g。将该培养基混合液稀释至1L,在0.1MPa大气压下灭菌30min。1.2.2　亚硝化菌富集培养基　将硝化细菌富集培养基中的NaNO20.5g改换为(NH4)2SO40.66g,其他成分、含量相同,在0.1MPa大气压下灭菌30min。1.3　分离培养基1.3.1　硝化菌分离培养基　A液:NaCl2.7g,MgSO4·7H2O1.4g,FeSO4·7H2O0.3g,NaNO22.5g,NaHCO316g,蒸馏水100ml;B液:KH2PO41.4g,蒸馏水100ml。将A、B液以体积比为9:1的比例混合,再在混合液中添加0.4ml的含有Mn,B,Cu,Zn,Co的微量元素溶液,于0.1MPa大气压下灭菌30min。1.3.2　亚硝化细菌分离培养基　将A液中的NaNO2改换为110g/L的(NH4)2SO4,其余成分、含量相同,于0.1MPa大气压下灭菌30min。1.4　硅胶平板的制备[2]称取100g硅酸钠,加蒸馏水605ml,溶解后成为水玻璃。再将稀酸与水玻璃按2:1(V:V)的比例