同位素稀释质谱法测定蜂蜜中4种硝基呋喃代谢物

同位素稀释质谱法测定蜂蜜中4种硝基呋喃代谢物于慧梅1,陈大舟2,汤桦2,刘娜1,李蕾Ξ1(1.北京化工大学理学院,北京100029;2.中国计量科学研究院化学计量与分析科学研究所,北京100013)摘要:研究了蜂蜜中4种硝基呋喃代谢物:呋喃唑酮代谢物(AOZ)、呋喃它酮代谢物(AMOZ)、呋喃妥因代谢物(AHD)、呋喃西林代谢物(SEM)的同位素稀释HPLC2MSΠMS分析方法,以邻硝基苯甲醛作为衍生化试剂,AOZ2d4、AMOZ2d5、AHD213C3、SEM·HCl2(13C,15N2)作内标,并将超声波衍生化法应用到实际样品的分析测试当中,以乙腈2011%甲酸为流动相,采用梯度洗脱,15min可将4种代谢物完全分离,再以MSΠMS进行定性和定量分析。加标回收率为82%～112%;定量限(LOQ)为0105～1μgΠkg;检出限(LOD)为0101～0125μgΠkg。该方法满足欧盟(EU)对进出口蜂蜜中硝基呋喃代谢物的检测要求。关键词:硝基呋喃代谢物;高效液相色谱Π串联质谱;蜂蜜;同位素稀释中图分类号:O657.6文献标识码:A文章编号:100020720(2008)122038205硝基呋喃类药物(nitrofurans)主要是指呋喃唑酮(furazolidone)、呋喃它酮(furaltadone)、呋喃西林(nitrofurazone)、呋喃妥因(nitrofurantoin)等引入硝基的人工合成抗菌药。研究证明,硝基呋喃类药物是一种诱导有机体基因突变的有害物质[1],近年来欧盟(EU)、韩国和我国在食用动物禁用的兽药中已明令禁用硝基呋喃类药物[2,3]。由于硝基呋喃类药物在动物体内数小时内可降解,因此测定母体化合物的呋喃残留不能客观反映真实情况[4,5]。而其代谢产物能与蛋白质紧密结合,形成稳定的残留物,残留时间达数周之久[6],甚至在蒸煮、烘烤、磨碎和微波加热过程中也无法有效降解,因此检测硝基呋喃类药物的代谢产物,对监控禁药更具实际意义。硝基呋喃代谢物可用液相色谱(HPLC2UV),液相色谱2质谱(HPLC2MS)或液相色谱2串联质谱(HPLC2MSΠMS)进行检测[7,8]。采用HPLC2UV测定,检出限达不到欧盟的规定。而HPLC2MS不适合直接用于硝基呋喃代谢产物的检测,所以通常选用邻硝基苯甲醛为衍生化试剂与在酸性条件下水解游离出来代谢物的自由氨基反应,从而可以增大待测物的分子量,提高质谱检测灵敏度。目前欧盟认为HPLC2MS方法也只能用于硝基呋喃代谢产物的筛选实验,对检出的阳性结果必须再用PLC2MSΠMS进行确证。欧盟EECΠ657Π2002指令规定对于禁用药物的质谱确证方法必须达到4个确证点(一个质谱离子为一个确证点)。本文采用同位素稀释HPLC2MSΠMS,与HPLC2MSΠMS定量分析中采用的其它内标技术相比,同位素内标化合物因为几乎相同的化学、物理性质,因此可以最大限度的降低系统误差。通过已知浓度的同位素内标化合物的变化来抵消待测物的同比损失,提高了检测的稳定性和定性定量分析的准确性。由于2005年欧盟05Π573EC指令中新增加了要求中国蜂蜜在出口前必须经过兽药残留量特别是硝基呋喃代谢物(<1μgΠkg)的检测[9]。因此论文使用超声波衍生化法,采用同位素稀释HPLC2MSΠMS分析蜂蜜中硝基呋喃代谢物的残留量。—83—第27卷第12期2008年12月分析试验室ChineseJournalofAnalysisLaboratoryVol.27.No.122008212Ξ收稿日期:2007207217;修订日期:2007210212基金项目:“十一五”国家科技支撑计划重点(2006BAF07B03)项目资助作者简介:于慧梅(1979-),女,硕士;E2mail:lilei@mail.buct.edu.cn1实验部分1.1仪器与试剂高效液相色谱2质谱仪:Agilent21100色谱工作站(AgilentCorp.USA),配有MSDXCT离子阱质谱系统;TouchMixerMT251漩涡振荡器(YamatoSci2entific,Tokyo,Japan);BF22000A氮气吹干装置(八方世纪公司)。MettlerToledopH测量仪;Sigma3K15离心机。AOZ、AMOZ(Witega公司,纯度99%);SEM、AHD、同位素标记物AOZ2d4、AMOZ2d5、AHD213C3和SEM·HCl2(13C,15N2)(Sigma2aldrich公司,纯度99%);邻硝基苯甲醛(ACR