慢性发光菌毒性实验体系

1.慢性毒性测试溶液：细菌悬浮液=1:1注：测试溶液是一系列被稀释的有机物，有机物的量不超过5%；细菌悬浮液是含有发光菌的SSWC培养基。参考文献：TOXICITYTESTINGWITHVIBRIOFISCHERI:ACOMPARISONBETWEENTHELONGTERM(24H)ANDTHESHORTTERM(30MIN)BIOASSAY2.绘制生长曲线F3经一夜培养得到F4，F4浊度达到500~700FTU，工作菌液的浊度是20FTU，在15℃下培养。在微型板上加100ul培养基（包括空白和实验），30min测一次光值，测量1h，之后1h测一次，测量23h。绘制出发光菌的生长曲线图。参考文献：Toxicitytestingwithluminescentbacteria–Characterizationofanautomatedmethodforthecombinedassessmentofacuteandchroniceffects3.急性毒性F3:每周一次，接种200ul的初始细菌液体到20mL无菌海水营养培养基（SSWC），在24ºC下培养24小时。（我们是200ul到5ml低倍培养基）F4：取一个特定的体积的F3用2％的NaCl溶液溶解稀释并达到2*103-1*106RLU（相对光单位）实验：在微型板上加空白样品（200ul的2％NaCl溶液）和实验样品（100ul菌液和100uL2％的NaCl溶液），曝光15min，测光值。参考文献：ComparativeevaluationofacutetoxicitybyVibriofischeriandfernsporebasedbioassaysinthefollow-upoftoxicchemicalsdegradationbyphotocatalysis4.急性与慢性（1）急性毒性与第1个体系一样，测试溶液和细菌悬浮液的比例是1:1。测试溶液是一系列被稀释的有机物，细菌悬浮液是含有发光菌的SSWC培养基。培养30min后测光值。（2）慢性毒性a.培养7h各组分比例菌液：测试溶液：5倍浓缩培养基（SSWC）：NaCl=1;5:2:2,在20℃振动培养7个小时，测光值。b．培养24h同（1），体系、比例一样，24h后测光值。参考文献：BioassayswithVibrio®scherifortheassessmentofdelayedtoxicity附：带表格SSWC培养基(DINENISO11348):胰蛋白胨[5%(w/v)],酵母膏[0.5%(w/v)],甘油[0.3%(v/v)],NaCl[3%(w/v)],NaH2PO4[44.2mM],K2HPO4[12.1mM],MgSO4.7H2O[0.8mM],(NH4)2HPO4[3.8mM];pH=7表1SSWC培养基各组分化合物含量浓度（g/L）比例（%）NaCl0.5M29.250.02925NaH2PO444.2mM6.8956420.006895642K2HPO412.1mM2.7614620.002761462MgSO40.83mM0.09989889.98988E-05(NH4)2HPO43.8mM0.497985440.000497985甘油41mM3.77584580.003775846蛋白胨5g/L50.005酵母提取物0.5g/L0.50.0005