用NBT还原法检测细菌无细胞溶解物中SOD活性_徐军发

用NBT还原法检测细菌无细胞溶解物中SOD活性徐军发1凌天翼2唐俊杰2(1广东医学院检验系,湛江5240232贵阳医学院免疫学教研室,贵阳550004)摘要目的:了解不同细菌无细胞溶解物中SOD活性。方法:采用NBT还原法检测2株大肠杆菌和8株沙门氏菌(其中7株伤寒沙门氏菌、1株鼠伤寒沙门氏菌)无细胞溶解物中SOD活性。结果:2株大肠杆菌SOD活性明显低于8株沙门氏菌(P<0.01);鼠伤寒沙门氏菌SOD活性明显高于伤寒沙门氏菌(P<0.01);而伤寒沙门氏菌L型返祖株SOD活性低于其它株伤寒沙门氏菌(P<0.01)。结论:不同细菌的SOD活性有差异;伤寒沙门氏菌L型返祖株细胞壁的缺陷可能是导致其SOD活性降低的原因之一。关键词SOD;大肠杆菌;沙门氏菌;NBT还原法中图分类号R446.5DetectionofSODactivityincell-freeextractsfrombacteriawithNBTreductionassayXuJunfa,LingTianyi,TangJunjie(DepartmentofLaboratoryMedicine,GuangdongMedicalCollege,Zhanjiang524023)AbstractObjective:Todetectthesuperoxidedismutase(SOD)activityincell-freeextractsfromdifferentbacteria.Methods:TheSODactivityincell-freeextractsfromtwostrainsofEscherichiacoliandeightstrainsofSalmonella(in-cludingsevenstrainsofS.typhiandastrainofS.typhimurium)wasdetectedbytheinhibitionofnitrotetrazolium(NBT)reduction.Results:TheSODactivityoftwostrainsofE.coliwasobviouslylowerthanthatofeightstrainsofSalmonella(P<0.01),andtheSODactivityofE.coliandS.typhiwaslowerthanthatofastrainofS.typhimurium(P<0.01),butinthecell-freeextractsfromastrainofS.typhiL-typereverstant(Str),theSODactivitywaslowerthanthatoftheotherstrainsofS.typhi(P<0.01).Conclusion:TheSODactivityincell-freeextractsfromdifferentbacteriavaryfromeachother,andinS,typhi,thedeficiencyofthecellwallmayresultinthedescentofSODactivity.Keywords:SOD;E.coli;Salmonella;NBTreductionassaySOD广泛存在于动、植物和微生物体内。细菌的SOD可以歧化内、外环境中产生的O·-2,是细菌在有氧环境中生存所必需的。有报道星形奴卡氏菌[1]、结核分枝杆菌[2]的SOD含量与其毒力密切相关,而且细菌的SOD与其逃避吞噬细胞的杀伤有关[3,4]。此外,不产SOD的大肠杆菌较其野生型亲代易被人血清(补体)及吞噬细胞杀伤[5]。为了进一步研究沙门氏菌的SOD与其毒力的关系,本文建立了NBT还原法检测细菌无细胞溶解物中SOD活性的方法,检测了2株大肠杆菌和8株沙门氏菌无细胞溶解物中SOD活性,并就显色温度对SOD检测结果的影响作了初步探讨。1材料与方法1.1试剂和仪器核黄素(Rb)(日本进口,上海化学试剂采购供应站分装)、四甲基乙二胺(TEMED)(上海前进农场试剂厂)、硝基四氮唑蓝(NBT)(中科院生化研究所)和牛红细胞SOD(Sigma公司,比活性为3800U/mg)。其余试剂均为国产分析纯。CPS-1A超声波破碎机(上海超声波仪器厂)、751G分光光度计(上海分析仪器厂)、LG103冷冻离心机(北京医用离心机厂)及光照箱等。1.2菌株4株野生型伤寒沙门氏菌(抗原类型均为O9ViHd,分别简称为Stw1、Stw2、Stw3和Stw4)和1株野生型大肠杆菌(抗原类型为O128K67,简称为O128K67)均为贵阳医学院第一附属医院检验科自病人标本中分离。伤寒沙门氏菌H901株(简称H901)、疫苗候选株(ty21a)、鼠伤寒沙门氏菌毒力株(简称Stm,抗