异养菌静态法评定化学杀生剂杀菌性能

理化检验-化学分册PTCA(PARTB:CHEM.ANAL.)2005年第41卷6知识与经验异养菌静态法评定化学杀生剂杀菌性能杨海燕(独石化公司研究院,克拉玛依市833600)朱万学(独石化公司二电化学车间,克拉玛依市833600)中图分类号:O65文献标识码:B文章编号:1001-4020(2005)06-0436-02工业循环冷却水系统存在严重的微生物危害,需定期投加杀生剂,以控制微生物的生长,因此杀生剂杀菌性能的评定尤为重要[1]。本方法采用平皿倾注法[2],通过稀释、接种、制平板、恒温培养、检查结果[2]等步骤进行评定,在大量试验的基础上,对试验条件进行了优选,提高了测定的准确度。1试验部分1.1主要仪器与试剂HH.BH420-S型电热恒温培养箱:温度范围5～60℃。202-2型干燥箱:300℃,3.2kW。ST-201紫外消毒灯:4～80WKQ-SG46-2803不锈钢手提式压力蒸汽灭菌器:额定压力0.14MPa,额定温度126℃,功率2000W。YR-43超净工作台无菌生理盐水(0.85%):称取氯化钠8.5g,加蒸馏水1L,搅溶后每支试管分装9mL,分别塞上棉塞,包上牛皮纸,用线绳扎好,121℃/30min灭菌备用。营养琼脂(BR):称取4.5g加入100mL蒸馏水中,121℃高压灭菌20min备用。供试菌水:由循环冷却水中分离提纯,选数量最多具代表性的一种,一般异养菌数在105～107个·mL-1之间。1.2试验方法取含菌量在105～107个·mL-1的现场水样或富集培养后的水样,搅匀后分装于若干支500mL锥形瓶中(具体瓶数由同一批次的药剂种数和浓度等级数而定),每瓶200mL,其中一份不加药剂处理作为空白对照,以测起始菌数,其余分别加入一定浓收稿日期:2004-02-27度的各种供试杀生剂。菌水经杀生剂作用一定时间(常为药剂加入后的1,4,8,12,16,20,24h)后,按十级稀释法,逐级稀释至所需的浓度,分别取1mL上述稀释液,接入培养皿中。每种药剂做3～5级稀释度,每级稀释度做3～5个平行皿,再在已接种的培养皿中倒入融化并冷至45℃左右的琼脂培养基,每皿15～20mL,摇匀、静置、冷凝,倒置平皿,于28～30℃恒温培养,培养72h后取出检查结果,按平皿计数法计算菌落,作好记录,此即为不同时间的存活菌数,然后计算杀菌率:杀菌率=起始(空白)的菌数-处理后的存活菌数起始(空白)菌数×100%2结果与讨论2.1试验菌种与菌量因为工业循环冷却水中,异养菌不仅生长繁殖最快,而且为数最多,基本上代表了水中全部好氧菌的数量,一般测定时,以这类细菌的数量作为细菌总数,因此,为切合实际,应采用现场水中的混合异养菌,而且水样中的菌量对药剂的杀菌率影响很大。为了使试验结果有可比性,水样中异养菌的总数应控制在105～107个·mL-1范围,若现场冷却水的异养菌数低于105个·mL-1时,应进行富集培养,提高菌量。方法为取菌数低于105个·mL-1的循环水样10mL,加入100mL琼脂培养基中,摇匀后置30℃恒温培养24h,吸取上述培养液适量(一般为5mL),加入取自循环水的水样(195mL),这样可使供试水样中的异养菌数达到105～107个·mL-1。2.2无菌生理盐水的浓度控制为维持微生物在适当的渗透压的溶液中正常生活,不至于因稀释过程中微生物在低渗溶液中微生物的细胞胀裂死亡,在工业水处理微生物分析检测中,应采用0.85%的生理盐水稀释。·436·理化检验-化学分册杨海燕等:异养菌静态法评定化学杀生剂杀菌性能2.3pH值条件的选择一般在pH6.0～9.5范围内选取几个pH等级。根据试验所需的pH条件,调整各锥形瓶中pH值至规定值(用100g·L-1NaOH溶液或HCl(1+9)溶液进行杀菌试验,根据结果绘制某一药剂浓度下某一时间的pH值的杀菌率曲线,最终确定所评杀生剂使用的最佳pH条件,一般pH为7.2～7.4。2.4水样的稀释度用无菌吸管吸取水样1mL,移至装有9mL无菌生理盐水的试管中,并随即用吸管将液体吸吹至少三次以上,使之混合均匀,此时稀释度为101,另取无菌吸管吸取101稀释液1mL,移入下一支9mL无菌生理盐水的试管中,照样充分混匀,此时稀释度为102,按同法依次稀释成103、104、105,直到所需稀释度。2.5药剂浓度与药剂浓度的稀释法作为高效杀生剂,在一般循环冷却水中的正常处理中,投加浓度不应超过100mg·L-1,在此范围内选取几个浓度等级进行试验。为使药剂操作方便,试验前应将供试药剂原液用无菌蒸馏水作无菌处理,稀释的程度为1mL的药剂稀释液加入到199mL水样中后刚好达到试验所需要的浓度。若试验需要100mg·L-1,则将原液稀释成2000mg·L-1即可,其余类推.药剂稀释液应现用现配,不宜储存。2