饮用水中致病性原生动物的检测及灭活研究

第1期81第11卷第1期2013年3月深圳信息职业技术学院学报JournalofShenzhenInstituteofInformationTechnologyVol.11No.1Mar.2013[收稿日期]2012-12-14[基金项目]广东省自然科学基金(S2012040007855);广东省科技攻关(2011B030800018);深圳市科技计划(JCYJ20120617141700417)[作者简介]冉治霖（1980-），男（汉），河南省郑州人，讲师，博士，主要研究方向：水污染控制与资源化；E-mail:ranzl@sziit.edu.cn饮用水中致病性原生动物的检测及灭活研究摘要：随着全球范围内的致病性原生动物疾病的流行及爆发，饮用水中隐孢子虫和贾第虫（简称“两虫”）感染作为一个无法忽视的公共健康问题引起了广泛的关注与研究。我国新颁布的饮用水标准中也对饮用水中“两虫”的检测阈值做了规定（10L水中小于1个）。本文对目前国内外“两虫”的检测与灭活方法进行了归纳，并进行相应的评述，不仅有助于“两虫”疾病的预防控制，而且对保障我国居民饮水安全具有重要意义。关键词：饮用水；原生动物；检测；灭活中图分类号：X1文献标识码：A文章编号：1672-6332（2013）01-0081-06【博士论坛】水是世界上分布最广泛的自然资源，也是人类社会和一切生命活动所必须的物质。随着工业的迅速发展，人口急剧增长和生活水平提高，需水量的增长将超过天然来源，众多的国家和地区面临着水资源危机的紧迫局面。饮用水安全是国家公共卫生安全体系的重要组成部分，与人民身体健康和社会稳定气息相关。2006年我国颁布了新的生活饮用水卫生标准（GB5749-2006），与1985年的标准相比，水质指标由35项增加至106项，特别是规定了隐孢子虫和贾第虫（以下简称“两虫”）的水质标准（10L水中小于1个）。因此，为了适应新的水质标准，众多供水生产企业均面临工艺改造，技术革新等问题。“两虫”疾病呈全球性流行趋势，其中六大洲74个国家有报道，至少300个地区发现“两虫”疾病的流行。全世界每年约有150万5岁以下儿童感染，美国约有3-4%的AIDS患者感染本病，非洲和海地等则高达50%[1]。由于水中的“两虫”难以被检测及被传统的消毒工艺灭活，所以新型的检测及消毒技术亟待被发现。国外在这方面已经有一些研究，而国内尚处于起步阶段，本文对目前国内外“两虫”的检测与灭活方法进行了归纳，并进行相应的评述。1隐孢子虫和贾第虫的检测方法美国国家环保局于1992年发布的USEPA1623是目前国际上最常用的标准检测方法。该方法分三个主要步骤：卵囊的浓缩、纯化以及检测。关于浓缩与纯化的方法报到较多，这里将不再进行赘述。下面将分两方面就“两虫”的检测方法进行论述。1.1卵囊数量的检测和计数（1）免疫学检测方法（a）免疫荧光技术随着检测技术的发展，免疫荧光技术也渐渐成熟起来。免疫荧光技术分为：直接免疫荧光测定(DirectImmunofluorescenceAssay，DFA)和间接免疫荧光测定(IndirectImmunofluorescenceAssay，IFA)两种技术。间接免疫荧光技术（IFA）目前应用较为广泛。该方法利用特异性抗体与抗原结合反应的原理，达到检测的目标。Gomez-Couso等[2]分别用IFA和PCR对222份河蚌样品进行检测，观察河蚌隐孢子虫和贾第虫的污染程度，结果IFA检测出54份阳性样品，PCR检测出28份阳性样品，IFA检出的阳性样品数明显高于PCR检测结果。余素华等[3]也利用IFA法成功检测出水中的隐孢子虫卵囊。冉治霖1,胡健龙2,张朝升2,李绍峰3（1.深圳信息职业技术学院交通与环境学院，广东深圳518172；2.广州大学土木工程学院，广东广州510006；3.深圳职业技术学院建筑与环境工程学院，广东深圳518055）82深圳信息职业技术学院学报第11卷直接免疫荧光技术（DFA）是最早的免疫荧光技术。由于该方法在诊断“两虫”的特异性和灵敏度上差异很大，因此应用并不广泛。(b)酶联免疫吸附试验（ELISA）酶联免疫吸附剂测定(EnzymeLinkedImmunosorbnentAssay)是一种将可溶性的抗原或抗体吸附到聚苯乙烯等固相载体上，进行免疫反应的定性和定量的分子生物学方法。Wang[4]等从隐孢子虫中分离出CP23基因表达并获得重组蛋白，建立了CP23-ELISA间接免疫检测法，该方法与传统检测法相比灵敏度更高。Elgun[5]等对医院154位腹泻病人的粪便样品进行抗原ELISA检测，检测到37份阳性（24.03%），其特异性为80.1%，敏感性为100%。目前可通过购买商业化的ELISA试剂盒来有效检测粪便中的卵囊，但尚无法大规模的使用到水环