产酸相稳定发酵类型微生物生态学研究

产酸相稳定发酵类型微生物生态学研究赵丹，任南琪，王爱杰，陈晓蕾（哈尔滨工业大学环境生物技术研究中心，哈尔滨150090）摘要：通过产酸发酵反应器的动态试验，考察生态因子（pH、ORP）等制约的不同发酵类型顶极群落的结构、优势种群的组成和生态演替的规律，阐明不同发酵类型代谢及其顶极群落的典型特征，揭示产酸发酵过程中顶极群落内平衡与反馈调节的生理代谢机制，并以pH值、ORP来表征生态演替过程中优势种群的生态位图。关键词：产酸发酵反应器；生态因子；顶极群落；生态演替；生态位中图分类号：X171文献标识码：A文章编号：1003-6504（2003）06-0037-03Ghosh和Poiand在1971年提出了利用相分离的原理：分别控制适应于产酸发酵菌和产甲烷菌的最佳生理及生态条件，从而形成具有较高运行稳定性和处理效率的两相厌氧生物处理系统。目前，对于两相厌氧生物处理的微生物生态学的研究普遍受到重视，但是由于产甲烷菌具有种类少、生长繁殖慢、利用底物种类有限、对环境条件敏感等特性，使得人们长久以来认为产甲烷相是两相厌氧处理系统中的关键“限速步骤”，因此大多数研究集中于产甲烷相微生物的生态学研究上。事实上产酸相不同生态条件下形成的末端发酵产物作为产甲烷细菌利用的底物，对产甲烷相乃至整个工艺的稳定运行具有至关重要的作用［1］。以往的研究表明，产甲烷相微生物对底物的转化速率依次为乙醇>戊酸>丁酸>乙酸>丙酸，而乙酸的转化是系统产甲烷即去除效率的“限速步骤”。从整个系统角度出发，产酸相最佳发酵类型应为乙醇型发酵［2］。因此利用连续流产酸发酵反应器，通过对限制性因子（pH、ORP）的调控，考察在人工创建生境中，微生物所遵循的群落与种群生态学演替规律，不同发酵类型的顶级群落内平衡与反馈调节的生理代谢机制，得出以pH、ORP表征的生态演替过程中优势种群的三维实现生态位，这对于进一步阐明产酸相不同发酵类型的生态学规律，提高两相厌氧的整体处理水平具有新的思路和理论指导意义。1试验材料与方法1.1实验装置采用沉淀区和反应区一体化、内设气—液—固三相分离装置的连续流搅拌槽式厌氧反应器（CSTR）作基金项目：国家自然科学基金项目（59578021）作者简介：赵丹（1972-），女，苏州科技学院环保系讲师，在读博士，主要从事环境生物技术、废水生物处理等方向的研究。为产酸相反应器，有效容积为3.1L，通过对pH、ORP进行调控进行平行实验；反应器外部缠绕电热丝结合温控仪保证内部温度（3011C）的厌氧条件，实验中控制COD负荷为8kg/m3·d，进水COD浓度为4000mg/L。具体流程见图1所示。1.2实验底物与分析方法采用废糖蜜为底物，并按照CODINIP=800~1000I5I1配以少量N、P。采用标准方法分析测定COD、pH、ORP（以电极电位Eh计，mV）。液相发酵产物采用SC-7气相色谱分析仪，按照任南琪［1］（1994）建立的检测方法进行分析。厌氧细菌的培养采用改进的Hungate技术，鉴定方法参见参考文献［3］。1.配水箱2.进水3.产酸发酵器4.出水5.气体管6.水封瓶7.湿式气体流量剂8.磁力搅拌器9.温控仪10.出水箱图1实验流程图2结果与讨论产酸发酵类型指依据酸性末端产物中挥发性脂肪酸（VFA）的分布判断微生物的生理代谢途径。酸性末端产物中始终占据主导地位的物质定义为相应的代谢类型，并将产酸发酵生态系统达到稳态时代谢的优势种群定义为顶极群落。产酸相的三种发酵类型中，丁酸型发酵和丙酸型发酵分别以丁酸或丙酸为主要液相末端发酵产物，而乙醇型发酵的主要液相末端产物为乙醇和乙酸。生态演替是生物群落的一个动态变化特性，具有·73·产酸相稳定发酵类型微生物生态学研究赵丹，等定向性、可调控性、趋于稳定性。由于环境因素（因变因子：pH、ORP）、微生物内部群落及末端代谢产物组成的协调控制，产酸相微生物群落在随环境因素定向演替的同时，由于群落的内平衡和反馈调节机制，又保持了相对的稳定性，即形成与不同发酵类型相对应的特征顶级群落生态系统，顶级群落中微生物通过种间竞争和协同作用选择优势种群，形成复杂的生态学决定关系［4~5］（图2）。图2产酸发酵生态因子调控规律2.l乙醇型顶极群落的结构模式及生态演替产酸发酵反应器的乙醇型发酵是以H2为主要气相产物，乙醇、乙酸为主要液相产物的发酵类型，在ORP、pH特别低的情况下，以产生乙醇的方式保证细胞内部的正常pH值，以维持机体正常产能和合成代谢，同时每产生lmOI乙醇，氧化NADH的量为2mOI，以此实现NAD+/NADH的耦联，并产生lmOI氢气见表l。乙醇型发酵具有很强的稳定性，不同反应器及不同运行阶段的乙醇型发酵微生物优势菌群见表2。表1葡萄糖发酵产氢、产ATP、氧化NADH的能力产生lmOI产物所产生的H2量（mOI）