农村生活污水培养杜氏盐藻的初步研究_张扬

黑龙江农业科学2011(6):39～41HeilongjiangAgriculturalSciences土壤·资环·能源农村生活污水培养杜氏盐藻的初步研究张扬,刘亚梦,高苑融,覃丹凤,袁玫,肖泽雨(山东大学威海分校海洋学院,山东威海264209)摘要:通过以含有不同浓度(0、20%、40%、60%、80%、100%)的农村生活污水的培养基培养杜氏盐藻,研究了不同浓度的农村生活污水对杜氏盐藻生长、β-胡萝卜素含量、叶绿素a含量、蛋白质含量及可溶性糖含量的影响。结果表明:盐藻在各种处理培养基中都能生存,当培养到第21天时,不含污水样品的β-胡萝卜素含量和叶绿素a含量最高,含100%污水样品的β-胡萝卜素含量和叶绿素a含量最低,含60%的污水样品的蛋白质含量最高,含100%的污水的样品可溶性糖含量最高。可见,用适当浓度的农村生活污水可以培养杜氏盐藻。关键词:农村生活污水;杜氏盐藻;β-胡萝卜素;叶绿素a;蛋白质;可溶性糖中图分类号:Q949.2文献标识码:A文章编号:1002-2767(2011)06-0039-03收稿日期:2011-03-14基金项目:山东大学威海分校大学生科技立项资助项目(A10045)第一作者简介:张扬(1989-),女,吉林省长春市人,在读学士,从事微生物生理学研究。E-mail:yangzhang77@163.com。杜氏盐藻(Dunaliella)是一种无细胞壁的双鞭毛单细胞真核绿藻,隶属绿藻门、绿藻纲、团藻目、杜氏藻科。该藻富含胡萝卜素、甘油和蛋白质等,是一种重要的海洋经济藻类,在食品、医药和养殖业中具有独特的商业价值[1]。目前,降低盐藻的生产成本是比较迫切的问题。国内已经有用啤酒废水和碱厂污水培养盐藻的研究[2-3],但用农村生活污水培养盐藻还未见相关的报道。农村生活污水中主要污染物为COD、氮和磷,污水中的有机污染物含量低于城市污水,水质相对较稳定[4-5]。该研究采用农村生活污水培养杜氏盐藻不仅使污水得到很好的净化,而且还能使营养物质得以循环,可降低微藻的生产成本,生产的微藻可应用于食品和养殖业,防止环境污染,为农村生活污水的合理利用提供新途径。1材料与方法1.1材料供试微藻物种为杜氏盐藻(Dunaliella),由山东大学威海分校海洋学院藻种室提供。农村生活污水采自威海市东涝台村。1.2培养基基本培养基为改良的Johnsons培养基[6]。处理培养基:在改良的Johnsons基本培养基基础上,添加农村生活污水,使培养基中的污水浓度为0、20%、40%、60%、80%、100%。1.3培养液制备和培养条件在250mL三角瓶加入各种培养基150mL,取对数期藻种,每瓶中加入15mL藻液,密度达到2.3×105cell·mL-1。在自然光下培养,每天手摇3～5次,试验设3个平行,2次重复。1.4测定项目与方法1.4.1杜氏盐藻细胞数量的测定血球计数板法计数,每天1次,取平均数[7]。1.4.2杜氏盐藻内β-胡萝卜素含量的测定每5d取藻液1mL,加入0.2gNaCl,用90%丙酮充分萃取,取上清液,用90%丙酮定容至10mL,721分光光度计测定在波长450nm时的吸光值OD450[8]。β-胡萝卜素含量/mg·L-1=(定容体积×10×OD450)×1000÷(2500×取样体积)1.4.3杜氏盐藻内叶绿素a含量的测定每5d取藻液1mL,加入0.2gNaCl,用90%丙酮充分萃取,取上清液,用90%丙酮定容至10mL,分别测定波长645和663nm时的吸光值,求叶绿素含量。叶绿素a含量/mg·L-1=(8.02×OD663+20.21×OD645)×定容体积÷取样体积[8]。1.4.4杜氏盐藻细胞内可溶性糖含量测定取培养23d的各样品的藻细胞悬浊液,2000r·min-1离心20min,收集细胞,取0.1g鲜细胞,快速研磨,沸水浴抽提可溶性糖,以蒽酮法在630nm波长下比色测定可溶性糖的含量[9]。1.4.5杜氏盐藻内蛋白质含量的测定取培养23d的各样品的藻细胞悬浊液,2000r·min-1离心20min,收集细胞,取0.1g鲜细胞加入少量石39土壤·资环·能源黑龙江农业科学6期英砂和5mL蛋白质提取液Buffer,快速研磨,将研磨液转入离心管,6000r·min-1离心30min,取上清,用双缩脲法在550nm波长下比色测定总蛋白质含量[9]。2结果与分析2.1不同浓度的农村污水对杜氏盐藻生长量的影响用含有不同浓度的农村污水的培养基培养杜氏盐藻后,每天测定其细胞数量。结果表明,在前16d,随着培养时间的增加,各个样品的细胞数量持续增长,各样品的生长状况基本一致。从第17天起,含100%污水的样品细胞增长呈下降趋势,并与其它样品逐渐拉开距离,其它样品一直保持较高的细胞数量(见图1)。说明用一定浓度