初始pH和碳酸氢钠对底栖硅藻生长的研究

初始pH和碳酸氢钠对底栖硅藻生长的研究徐磊1,2钱振明1,3王长海1孙继波4周善祥51.大连理工大学生命科学与工程系2.大连市标准化信息中心3.大连交通大学电气信息学院4.大连供电公司5.大连市水产技术推广总站摘要研究不同初始pH和不同碳酸氢钠浓度对3种海洋底栖硅藻生长及生化成分的影响。双缝棱舟藻、双尖菱板藻细头变种和咖啡双眉藻分别在初始pH为8~9、8和8.5,NaHCO3浓度为0和0~5mg/L,0时生长最好;细胞具有较强的自我调节pH的能力,约在第6天,大部分培养基的pH均被调节到相近的值,此后保持稳定;咖啡双眉藻不同pH培养基中维生素C的含量随pH增加而降低,pH\8时趋于稳定;3种硅藻中,双尖菱板藻细头变种胞内蛋白含量最高,可达到22mg/L,咖啡双眉藻的叶绿素含量和胞内外多糖含量均最高,分别达到12.5、45和21mg/L,除了叶绿素含量,胞内蛋白含量和胞内外多糖含量均随pH梯度呈低)高)低的变化趋势;NaHCO3对3种底栖硅藻生化成分的影响不明显,不适合作为底栖硅藻的有效碳源。关键词底栖硅藻pH碳酸氢钠(NaHCO3)生长生化成分中图分类号:S852.6文献标志码:B文章编号:1002-2813(2009)08-0063-03海洋底栖硅藻是匍匐型贝类鲍、蝾螺和埋栖型贝类缢蛏、泥蚶及棘皮动物海参和海胆等名贵水产动物苗种生产中的重要饵料(陈世杰等,1977;马志珍等,1985;隋锡林,1990)。底栖硅藻不但可诱导鲍鱼幼虫的附着(RobertsR,2001),其胞外释放物也是幼鲍后期长到800Lm时的重要食物(KawamuraT,1995)。底栖硅藻质量的优劣直接影响苗种培育的成活率(张榭令等,1999)。因此,培养足量的优质底栖硅藻成为人工育苗生产中最重要的环节之一。pH和NaHCO3是影响海洋单细胞微藻生长的重要因素,也将影响胞内生化成分的合成和积累,而硅藻胞内生化成分含量也是影响幼鲍生长和变态的重要营养因子(李太武等,1995;陈世杰等,1998;赵东海等,2005)。关于pH和NaHCO3对底栖硅藻胞内外生理生化成分的影响研究甚少(陈长平等,2006)。研究底栖硅藻生长的最适pH和NaHCO3浓度条件及其分析生化成分的变化规律,对底栖硅藻饵料的规模培养和优质饵料的获得都具有重要的指导意义收稿日期:2009-04-27和应用价值。作者从大连近海筛选到8种底栖硅藻,并研究其作为水产动物幼体的附着变态及初期生长的饵料试验,获得了良好的效果(XingRL,2006)。试验观察初始pH和NaHCO3对其中3种底栖硅藻的生长及主要生化成分的影响,为其作为单一底栖硅藻饵料的规模培养及应用提供理论数据。1材料与方法1.1藻种试验所用3种海洋底栖硅藻均为从大连近海岸筛选到的藻种,分别是双缝棱舟藻、双尖菱板藻细头变种和咖啡双眉藻。1.2培养条件初始pH设定(6?0.1)、(7?0.1)、(8?0.1)、(8.5?0.1)、(9?0.1)和(10?0.1)共6个梯度;NaHCO3浓度设定0、5、10、20、50和80mg/L共6个梯度。采用添加硅酸钠的f/2培养基(Na2SiO3浓度为50mg/L),海水经抽滤(0.22Lm的滤膜)2次后,再高压灭菌20min。藻种活化后接种于300mL三角烧瓶内,接种密度为8万~10万mL,培养体积水生动物营养饲料研究FEEDRESEARCHNO.8,200963150mL,温度为(20?0.5)e,光照周期为12B12h,设3个平行,在ZPG-28型全自动光照培养箱中培养。1.3测定方法1.3.1细胞生长速率的测定每天摇匀硅藻,从3个不同位置随机吸取藻液,超声波分散细胞后于显微镜下计数。计算比生长速率:K=2.303@(lgN2-lgN1)/(T2-T1)。其中,N2为指数末期细胞个数,N1为指数初期细胞个数;T2为指数末期的时间,T1为指数初期的时间。1.3.2硅藻细胞生化成分的测定总叶绿素采用丙酮法测定(姚南瑜,1987),蛋白含量采用考马斯亮蓝法测定(王长海等,2005),胞内和胞外总糖采用蒽酮-硫酸法测定(王长海等,2005)。1.3.3维生素C的检测1.3.3.1高效液相色谱条件Agilent1100高效液相色谱仪,氰基柱(<5Lm,4.6mm@150mm);流动相0.5%(NH4)2HPO4,以H3PO4调节pH为2.5;检测波长254nm;流速为0.5mL/L;进样量为20LL。1.3.3.2样品测定取咖啡双眉藻培养基上清液,加同体积的氯仿萃取1次,经0.22Lm滤膜过滤后上机。2结果与分析2.1pH对3种底栖硅藻生长的影响图1初始pH对双缝棱舟藻生长的影响从图1~图3可见:双缝棱舟藻在初始pH为8~9时生长较好,在初始pH为6和10时细胞生长受到明显抑制;双尖菱板藻细头变种在初