氨氮测定方法的对比研究_陈一辉(1)

环境工程2011年第29卷增刊mol/L;乙二胺四乙酸二钠[EDTA]:0.2mol/L;其它试剂均为分析纯,水为二次蒸馏水。1.2测定原理1.2.1纳氏试剂法原理氨氮与纳氏试剂反应生成黄棕色的络合物,在400～500nm波长范围内与光吸收成正比,可用分光光度法进行测定。1.2.2酶法的原理基于谷氨酸脱氢酶催化下列反应:NH+4+α-酮戊二酸+NADHGLDH谷氨酸+NAD+H2O通过测定还原型烟酸胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)吸光度的变化率得出其酶促反应速度,对应不同NH4Cl浓度制得的标准曲线,从而可测得水样中的氨氮含量。1.3样品的测定1.3.1纳氏试剂法取适量预处理后的样品作为试料,转入50mL比色管,不到50mL的定容到50mL,浓度稍大时可进行稀释,使氨氮含量控制在测定的线性范围内,加入1.0mL酒石酸钾钠溶液,摇匀,再加入1.5mL纳氏试剂,摇匀,放置10min后,在420nm波长处,用20nm比色皿,以水为参比,测量吸光度。1.3.2酶法于石英比色皿中加人0.05mol/LTris-HCl缓冲溶液3mL,0.125mol/L铵标准液20μL,10μL0.5mol/Lα-酮戊二酸溶液以及10μL0.05mol/LNADH溶液后混匀,再加人10μL0.2g/LGLDH溶液,快速混匀后立即在343nm波长处测定吸光度变化值(■A)(每隔15s读一次吸光度值,共读10次),计算反应速度。V(μmol/min)=ΔA×反应液体积(mL)Δt(min)×ξ(L/mmol·cm)×b(cm)根据米式方程:1/V=Km/(Vmax[NH4+])+1/Vmax,由酶促反应速度可计算出NH4+的浓度。2结果与讨论两种方法标准曲线的回归方程分别为:纳氏试剂法Y=5.2551X+0.004,R2=0.9999;酶法1/V=0.7158/[NH4+]+0.1104,r=0.997。说明纳氏试剂法和酶法的相关性均很好。2.1不同方法的测定法果对比分析为了探讨酶法的适用性,采集了建于重庆大学B区校园内的跌水曝气生物滤池的进、出水(1出、2出、3出、4出、5出分别表示滤池从上到下各采样口的出水),分别用酶法和纳氏试剂法测定其氨氮含量,然后对两种方法进行t检验[7]。结果见表1。选用进水水质的监测数据(见表2)进行t检验。表1纳氏试剂法与酶法测定氨氮结果比较纳氏试剂法进水1出2出3出4出5出进水酶法1出2出3出4出5出65.663.961.959.356.150.365.063.762.159.156.050.064.561.458.254.550.345.164.661.458.054.250.345.068.765.561.957.753.449.369.166.161.857.253.649.359.356.152.448.243.538.260.356.252.448.043.238.054.550.847.242.437.733.054.051.047.042.438.033.067.162.456.650.845.138.767.562.456.651.045.538.578.270.360.851.443.035.178.469.960.551.443.235.372.966.659.351.344.037.273.267.060.051.644.037.082.473.464.055.647.739.883.073.564.255.347.840.079.270.862.453.545.137.279.070.662.553.245.137.1表2纳氏试剂法与酶法测定对比测试方法测定数据∑纳氏试剂法65.664.568.759.354.567.178.272.982.479.2酶法65.064.669.160.354.067.578.473.283.079.0差数X0.6-0.1-0.4-1.00.5-0.4-0.2-0.3-0.60.2-0.17X20.360.010.161.000.250.160.040.090.360.042.47X=1n∑ni=1xi=110∑10i=1xi=0.017,235环境工程2011年第29卷增刊S=∑xi2-(∑xi)2nn-1=2.47-(-0.017)2109=0.524,t=X-0Sn=0.0170.52410=0.103。查t分布的双侧分位数表,得t0.05(10)=2.228,t=0.103<2.228,两种方法无显著性差异,证明酶法是一种可靠的氨氮测试方法。3结论1)t检验结果显示,纳氏试剂法与酶法的分析结果无显著性差异,酶法的准确度令人满意。2)纳氏试剂法的测定范围是0.025～2mg/L,而酶法的测定范围是不小于0.31mg/L,后者的适用范围较前者宽。3)纳氏试剂分光光度法对