水质粪大肠菌群操作注意事项 作业指导书1

水质粪大肠菌群操作注意事项 作业指导书1水质粪大肠菌群的测定多管发酵法作业指导书本试验基本操作参照《HJ/T347--2007水质粪大肠菌群的测定多管发酵法和滤膜法（试行）》制定此作业指导书。1.培养基、试剂与仪器本标准所用试剂除另有注明外，均为符合国家标准的分析纯化学试剂；实验用水为新制备的去离子水；操作者必须建立“无菌概念”和掌握“无菌操作技术”，所有涉及微生物操作的器皿必须进行灭菌，试验中避免所有可能造成微生物污染的操作。单倍乳糖蛋白胨培养液：称取23.0g乳糖蛋白胨培养基于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全，分装于含有倒置的玻璃倒管（杜氏小管）的20x200mm试管中，每试管10ml（注意玻璃倒管中不能有气泡，若出现气泡，可用手指轻弹玻璃管）塞紧塞子，置于高压蒸汽灭菌器中，在115℃灭菌20min，贮存于暗处备用。三倍乳糖蛋白胨培养液：称取69.0g乳糖蛋白胨培养基于1L蒸馏水中（注意煮沸步骤可能糊底，也可用二倍乳糖蛋白胨培养液替代），其它操作同上。EC培养液：称取37.0gEC肉汤于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全，分装于含有倒置的小玻璃管的试管中，每管10ml（操作方法同单倍乳糖蛋白胨营养液），于高压蒸汽灭菌器中，在115℃灭菌20min，贮存于暗处备用。伊红美蓝培养基：称取36.0g伊红美蓝培养基于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解后，分装于三角烧瓶中。于高压蒸汽灭菌器中，在121℃灭菌15min，贮存于暗处备用。生理盐水：在烧杯中配制适量的质量分数为0.9%的生理盐水，分装于试管中，每试管9.5mL，于高压蒸汽灭菌器中，在121℃灭菌15min，贮存于暗处备用。（本实验室中灭菌锅蒸发量为0.5mL）培养基的存放：在密封瓶中的脱水培养基成品要存放在大气湿度低、温度低于30℃的暗处，存放时应避免阳光直接照射，并且要避免杂菌侵入和液体蒸发。当培养液颜色变化，或体积变化明显时废弃不用。本实验室将培养基放置在4℃冰箱中保存。实验所需仪器：超净工作台（有条件的实验室建议使用生物安全柜）、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、冰箱、酒精灯、天平、电炉、500mL广口瓶、烧杯、玻璃棒、玻璃发酵管、试管架、移液管、移液枪、接种环等，详见附件。2.试验前期准备器皿灭菌（高压蒸汽灭菌）：所用采集水样的广口玻璃瓶、玻璃试管、移液管、玻璃棒、移液枪枪头等器皿均需放入高压锅灭菌。采样广口玻璃瓶：将清