毛细管电泳_间接化学发光法检测染发剂中苯二酚异构体和苯酚_徐向东

毛细管电泳-间接化学发光法检测染发剂中苯二酚异构体和苯酚徐向东1,2胡涌刚*1李欣欣11(华中科技大学环境科学与工程学院,武汉430074)2(华中科技大学化学系,武汉430074)摘要根据某些酚类化合物在碱性条件下具有能猝灭鲁米诺-铁氰化钾体系化学发光信号的特性,建立了毛细管电泳-间接化学发光分离检测苯二酚异构体和苯酚的新方法。电泳缓冲溶液选用7.5mmol/LNa2B4O7-2.5mmol/LNa2HPO4。在优化的化学发光和电泳条件下,对苯二酚、间苯二酚、邻苯二酚和苯酚在10min内可直接实现分离,其检出限(S/N=3)分别为2.9×10-8mol/L、3.7×10-7mol/L、8.4×10-8mol/L和4.4×10-6mol/L;相对标准偏差(RSD)为2.5%～4.8%(n=5)。通过对不同染发剂实际样品进行分离分析研究,证明该方法可以用于实际染发剂样品的分析测定,结果令人满意。关键词毛细管电泳,化学发光,苯二酚异构体,苯酚,染发剂2006-01-14收稿;2006-04-05接受本文系国家自然科学基金资助项目(No.20005005)1引言氧化型染发剂是广泛使用的永久性染发剂,它是由多种芳香族类化合物组成。由于这些芳香族类化合物中某些物质具有致敏性或致突变性,因此我国化妆品卫生标准(GB7916-87)对染发剂中染料使用量作了严格规定。其中,邻苯二酚以前用作染发剂,近年来经研究认为具有致癌及致突变活性,目前被列为禁用物质;间苯二酚、对苯二酚等67种化合物为限用物质。其中对苯二酚在化妆品中最大允许浓度为0.3%[1]。毛细管电泳(CE)技术是一种高效液相分离技术,具有高效、快速、灵敏、成本低等特点[2]。CE-化学发光(CL)联用技术及其应用研究已成为当前分析化学领域的研究热点之一[3,4]。目前,尽管CE-CL联用技术用于酚类化合物的分析测定国内外已有一些研究[5～8],但用于苯二酚异构体的检测未见报道。在碱性条件下,某些酚类物质具有能猝灭鲁米诺-铁氰化钾体系化学发光信号的特性,由此建立了检测染发剂中苯二酚异构体的新方法。该方法用于实际染发剂样品的分析测定,具有灵敏度高、分析速度快、成本低等特点,效果令人满意。2实验部分2.1仪器与试剂高压电源(上海原子能研究所);侧窗型光电倍增管(北京滨松光子技术有限公司);石英毛细管(河北永年光纤厂);侧窗直流前置放大器(南京大学微弱信号检测中心);千谱色谱工作站(上海千谱软件有限公司)。鲁米诺(美国Fluka公司);苯酚、对苯二酚、间苯二酚、邻苯二酚、铁氰化钾、氢氧化钠、四硼酸钠、磷酸氢二钠(均为国产分析纯);染发剂A(红棕色,广州市某化妆品厂)和染发剂B(浅啡紫色,广州市某日用品厂)。实验用水均为二次蒸馏水,所有溶液在使用前均经0.22μm滤膜过滤。2.2毛细管电泳-化学发光检测装置自组装毛细管电泳-化学发光装置为在柱套管式,与参考文献[9]相似。电泳分离毛细管(55cm×50μm.id.)、试剂引入毛细管(25cm×200μm.id.)和反应毛细管(15cm×530μm.id.)用三通接头固定。反应管为垂直放置,其中位于化学发光反应区的约1cm段烧去聚酰亚胺涂层作检测窗,使其正对光电倍增管入射窗。电泳分离毛细管的一端(约4cm)经HF刻蚀变细后插入反应管中,使刻蚀段的末端位于检测窗处。试剂引入管中的铁氰化钾溶液在反应毛细管中形成环绕分离毛细管的一段液流第34卷2006年9月分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报ChineseJournalofAnalyticalChemistry特刊S151～S154套,与分离毛细管末端流出的7.5mmol/L硼砂-2.5mmol/L磷酸氢二钠-2.0mmol/L鲁米诺溶液混合,产生化学发光。光电倍增管、三通装置、柱后试剂储液槽等密封于暗箱中以降低背景噪声。新毛细管使用前分别用0.1mol/LNaOH、0.1mol/LHCl和蒸馏水各冲洗10min,再用电泳缓冲液平衡1h。3结果与讨论3.1鲁米诺浓度的选择在0.1～5.0mmol/L范围内,考察了鲁米诺浓度对4种酚类物质相对发光强度的影响。当鲁米诺浓度为2mmol/L时,被分析物的相对发光强度最大。因此,优化条件下的鲁米诺浓度为2mmol/L。3.2铁氰化钾浓度和pH的选择在0.5～2.5mmol/L范围内,增大铁氰化钾浓度可使4种酚类物质的相对发光强度增强。但是,当铁氰化钾浓度高于2.5mmol/L时,发光强度反而降低。这可能是由于高浓度铁氰化钾对发光信号有部分吸收的缘故。因此,实验选择的铁氰化钾浓度为2.5mmol/L(见图1)。在本实验中,铁氰化钾作为氧化试剂,由柱后试剂引入管引入,与含有鲁米诺和被测物质的缓冲溶液发生反应。柱后试剂引入管的内径为200μm,而用于被测物质分