滇池束丝藻水华毒性生物检测

第28卷第2期2004年3月水生生物学报ACTAHYDROB1OLOG1CASIN1CAf、，、⋯；研究简报{L^，一一Vo1．28．No．2Mar．，2004滇池束丝藻水华毒性生物检测刘永梅刘永定李敦海沈银武(中国科学院水生生物研究所，武汉430072)王海珍BIOASSAYFoRTHETOXICITYoFAPHAMZD^E^lⅣFLOS—AQUAEBLooMFRoMLAKEDIANCHILIUYong·Mei，LIUYong—Ding，LIDun—Hal，SHENYin—WuandWANGHai—Zhen(InstituteofHydrobiology，theChineseAcademyofSciences，Wuhan430072)关键词：蓝藻水华；水华束丝藻；生物检测；麻痹性贝毒毒素Keywords：Cyanobacterialbloom；Aphanizomenonflos—aquae；Bioassay；Paralyticshellfishpoison(PSP)中图分类号：X174文献标识码：A文章编号：1000．3207(2004)02—0216—03近年来，由于外源污染物大量入湖，致使滇池水体呈富营养状态，蓝藻水华频繁爆发⋯。柬丝藻属与微囊藻属随季节演替，成为滇池蓝藻水华的两大优势种群。束丝藻水华暴发期间，滇池放养的滤食性鱼类出现死亡，其原因可能是由于丝状藻体堵塞鱼鳃部而引起，但也不能排除束丝藻毒素的影响。有毒束丝藻水华对鱼类的危害主要表现在几个方面：鱼类受到有毒束丝藻细胞所分泌毒素，如四氢嘌呤碱等毒性毒害；与束丝藻共生细菌毒害；或柬丝藻死亡后分解消耗水体中溶解氧造成水体缺氧等都是可以使鱼致死的原因l2。由于束丝藻高产毒的特性使之已成为普遍关注的热点之一l3一。国外曾报道蓝藻水华产生的毒素使牛和野生动物中毒死亡l4．5，而滇池束丝藻水华毒性尚未见报道。本文采用一种国际常用的检测方法——小白鼠腹腔注射法，对滇池束丝藻水华的毒性进行了检验。1材料与方法1．1材料水华束丝藻从滇池蓝藻水华中用浮游植物网采集。带回实验室后，依次过100、150、300目筛网，除去浮游动物及枯草等杂质。将浓缩的藻浆铺于滤纸上脱水。实验用昆明小白鼠(KM)购自中国科学院昆明动物研究所，属昆明品系，雄性，体重l8—22g。1．2样品采集时水体理化因子测定水温、pH、溶解氧(DO)采用13本DKK．TOA，公司生产的HM．20P、DO．24p水质自动测定仪进干亍测定。总氮采用过硫酸钾氧化一紫外分光光度法测定，总磷采用过硫酸钾氧化一钼锑抗分光光度法测定[。1．3藻类种群优势度确定样品用Iu’ssolution固定后，采用血球计数板进行群体计数。1．4干重测定称取1g经浓缩获得的鲜藻体，105℃烘干至恒重，称重为0．041g。1．5粗毒素的提取称取鲜藻体18．85g，加入50mL0．1mol／L乙酸溶液，用JY92．II型超声波细胞破碎仪(宁波新芝生物技术研究所)处理15min，再用磁力搅拌器搅拌30min，5000r／min离心15min，收集上清。向沉淀部分再加入25mL0，lmol／L乙酸溶液，重复上述操作，离心，合并上清，得到毒素粗提品1．6毒素粗提物初步纯化处理向粗提物中加入lOmL无水乙醇，混匀，以沉淀蛋白质和核酸等大分子。将混合物4200r／min离心15mln，收集上清，并用旋转蒸发仪浓缩干燥。浓缩的样品用0．1mol／L乙酸重新溶解，再加入lOmL无水乙醇，重复操作。将最终所得浓缩样品用50mol／L0．Olmol／L乙酸溶解，得到比较澄清的毒素提取物，并用lmol／LNaHCO3调pH值为6左右。1．7小鼠生物实验按照AOAC小鼠生物检测方法，采用纯收稿日期：2003．11-17；修订日期：2003．12．10基金项目：国家973项目(2002CBg12300)；国家重大环境课题(Kq9．05．35．01)；中国科学院方向性创新课题(220316)资助作者简介：刘永梅(1979一)，女，河南唐河人，博士，从事藻类生物学研究通讯作者：刘永定，liuyd@ihb．ac．12n维普资讯http://www.cqvip.com2期刘永梅等：滇池束丝藻水华毒性生物检测217种昆明小白鼠。毒素提取物用0．01moL／L乙酸适当稀释，并调pH为6。将l8只小鼠按体重分为6组，每组平均体重均为20．33±1．58g，以pH为6的乙酸溶液为对照组，按毒素提取物原液、1／2、1／4、1／8、1／16毒素提取物原液的梯度进行腹腔注射，每组3个重复。根据Sommer’S表，用小鼠体重及死亡时间进行校正，确定材料的毒性，以鼠单位(MU)表示。其定义为15min内使小鼠中毒致死所需的毒素量[8。实验组小鼠死亡后立即解剖，取肝脏和肺，用p117．2的磷酸缓冲液冲洗