郑州市主要生活饮用水源中微囊藻细胞的分离培养与毒性鉴定

*河南省医学创新人才工程基金资助项目�200311205;河南省教育厅科技攻关基金资助项目�200633000郑州市主要生活饮用水源中微囊藻细胞的分离培养与毒性鉴定*杨松芹�巴�月�张慧珍�程学敏�崔留欣#郑州大学公共卫生学院环境卫生学教研室郑州450001#通讯作者,男,52岁,教授,博士研究生导师,E�mai:lclx@zzu.edu.cn��关键词�饮用水;郑州市;微囊藻细胞;分离;鉴定��中图分类号�R123��摘要�目的:对郑州市主要生活饮用水源中微囊藻细胞进行分离培养和毒性鉴定。方法:采用改进的96孔板分离技术对郑州市2个主要生活饮用水源西流湖和黄河花园口段某调蓄池中采集的浮游藻类进行分离培养;全细胞PCR测定藻青蛋白基因中间序列(PC�IGS)和微囊藻毒素合成酶基因(mcyB);ELISA检测毒素浓度。结果:应用96孔板结合极限稀释法成功得到了所要分离微囊藻细胞的单克隆;所分离3株微囊藻细胞PC�IGS基因序列和mcyB基因序列扩增结果均为阳性;ELISA检测3株微囊藻细胞干粉的产毒量分别为1.07mg/g、4.70mg/g、4.71mg/g。结论:改进的96孔板分离技术能够简便、快速地分离各种藻细胞;所分离的3株微囊藻细胞均为蓝藻种属,且能够产毒。IsolationandidentificationofmicrocystisinZhengzhoumaindrinkingwatersourceYANGSongqin,BAYue,ZHANGHuizhen,CHENGXuemin,CUILiuxinCollegeofPublicHealth,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450001��Keywords�drinkingwater;Zhengzhoucity;microcystis;isolation;identification��Abstract�Ami:ToisolatethemicrocystisinthemainsourcewaterinZhengzhoucityandidentifythetoxicity.Meth�ods:Thealgaecellwasisolatedbythe96�microbiologicalassayandthephycocyaninintergenicspacerregion(PC�IGS)andthemicrocystinsynthetasegeneB(McyB)oftheisolatedalgaecellweredetectedbythewhole�cellPCR,andthetoxic�itywasidentifiedbyELISA.Results:Singlecellcloneswereacquiredsuccessfully,andthewhole�cellPCRresultswerepositiveofPC�IGSandMcyB,whichsuggestedthatthe3microcystiswerecyanobacteriaandtoxic.Thetoxincontentsofthethreemicrocystispowderwere1.07mg/g,4.70mg/g,and4.71mg/g.Conclusion:The96�microbiologicalassayisasim�pleandfastmethodwhichcanisolatethealgaecellsfromthewatersuccessfully.ThemicrocystisisolatedfromthemainsourcewaterinZhengzhoucityareblue�greenalgaeandtheycanproducemicrocystin.��随着水环境污染的加剧,大量工业废水和生活污水排放入水体,造成水中氮、磷含量急剧增加,导致水华现象在世界各地频繁爆发,给人类健康造成了很大的威胁[1�2]。水华所产生的主要污染物质是各种藻毒素,其中研究最多的是由铜绿微囊藻(mi�crocystinaeruginosa)、水化鱼腥藻(anabaenaflos�aquae)、颤藻(oscillationaeruginosa)、念珠藻(nos�toc)等产生的微囊藻毒素(microcystin,MC),它们是目前淡水水体中存在的对人类健康威胁最大的一种细胞内毒素[3�4]。为了解郑州市生活饮用水源中MC的污染状况,作者选择了郑州市2个主要生活饮用水源西流湖和黄河花园口段沉沙池(白庙水厂)的水样作为研究对象,对从中分离出的微囊藻细胞株进行培养,并鉴定其产毒特性。1�材料与方法1.1�藻样采集和培养�选择郑州市黄河花园口段沉沙池(白庙水厂)和西流湖为研究现场,采用25号浮游生