基于流式细胞法的铜绿微囊藻快速定量方法

第27卷第4期环境监测管理与技术基于流式细胞法的铜绿微囊藻快速定量方法康丽娟，孙从军(上海市环境科学研究院，上海200233)摘要：采用超声波细胞破碎仪处理地表水样品，可使群体藻细胞分散开，用浮游植物流式细胞仪实现水样的快速测定，最适测定时间为180s，藻细胞密度测定限值为5．0×10L～，当样品中藻细胞密度低于该限值时，可适当浓缩样品。以铜绿微囊藻特征指标判断，当该方法测得铜绿微囊藻密度在5．0×10L以下时，可判定样品中不含有铜绿微囊藻。关键词：铜绿微囊藻；流式细胞法；快速测定；水质中图分类号：X835文献标志码：B文章编号：1006—2009(2015)04—0054—04MethodforRapidQuantitativeAnalysisofMicrocystisAeruginosaBasedonFlowCytometryKANGLi—juan，SUNCong—jun(ShanghaiAcademyofEnvironmentalSciences，Shanghai200233，China)Abstract：ThequantityofMicrocystisaeruginosainsurfacewaterwasdeterminedbyaflowcytometry(FCM)method．Adetectionlimitof5．0×10。L’。wasachievedbycomparingtheaccuracyofdetermination．Thesuitablemeasuringtimewas180Swhichwasobtainedbyanalyzingtherepeatabilityoftestresults．Inthisstudyultrasonicpretreatmentwasinvestigatedinordertoimprovetheaccuracyofmeasuringresultsofalgalbloom．Theresultsshowthat，characteristicindexrangechangedafterpretreatment，anditstillcouldbeusedtomeasuretheconcentrationofMicrocystisbloom．Keywords：Microcystisaeruginosa；Flowcytometry；Rapiddetermination；Waterquality浮游植物是水体重要的初级生产者，其数量和种类是评价水体生态环境的重要指标。浮游植物定量检测方法主要是叶绿素a的测定及细胞计数法，前者测定结果仅代表浮游植物总体的生产能力，不能体现浮游植物群落特征；后者虽能对水体中藻类数量直接定量，但测定富含多细胞群体藻类及藻细胞密度过高或过低的样品时，不仅准确性差且工作量大，难以满足浮游植物种群动力学观测量大、连续测定的要求。目前，蓝藻水华依然是我国湖库面临的主要生态风险。蓝藻水华等富营养化灾害的形成过程往往很短，5d左右即可形成。为满足水体高频监测的需求，及时把握富营养化灾害的前兆及发展过程，一些先进的技术已应用到浮游植物检测中。自20世纪70年代以来流式细胞技术得到了迅速发展，浮游植物流式细胞仪结合浮游植物粒径、光一S4一学性质和内部结构特征在浮游植物定量研究中有巨大的应用潜力。20世纪80年代末，荷兰学者首次将流式细胞技术应用于藻类的检测。；结合色素荧光技术，Thyssen等。。将潜水型流式细胞仪应用于地中海港湾藻类的原位监测，分析了浮游植物的分布情况与种群变化；Malkassian等研究了浮游植物多样性；谭啸等用流式细胞技术研究不同温度下铜绿微囊藻与蛋白核小球藻间的竞争关系。利用室内纯培养体系，研究者在500多个备选指标中筛选出5个指标(FWSAverage、SWSAver一收稿日期：2014—09—10；修订日期：2015—05—12基金项目：上海市环境科学研究院创新基金资助项目(CX201201)作者简介：康丽娟(1979一)，女，河南许昌人，高级工程师，博士，主要从事水污染控制研究。第27卷第4期康丽娟等．基于流式细胞法的铜绿微囊藻快速定量方法2015年8月age、FLOrangeAverage、FLYellowAverage和FLRedAverage)作为铜绿微囊藻特征指标，其对应取值范围分别为142．33mV～482．07mV、94．O0mV～499．40mV、0．55mV～1．51mV、0．53mV～1．27mV、3．30mV～10．20mV。特征指标通过与显微计数及12种常见浮游植物混合后的区分度分析，对铜绿微囊藻的区分识别率为90％左右。今用浮游植物流式细胞仪对铜绿微囊藻快速定量检测，并探讨样品测定过程中的关键步骤，给微囊藻的快速检测提供一种手段，