TTC_脱氢酶活性测定法的改进_牛志卿

1994年21(l)微生与0.smol/LNaOH处理样品后,两种方法测定的结果都与样品中所含实际蛋白量接近,而用1·omol/LNaOH处理后测得的值则偏低。NaOH的浓度过高时测得的蛋白含量偏低,其原因需进一步探讨。物学通报品,以Lowry法测定细菌总蛋白含量,虽然比通常采用1.omol/LNaOH直接处理细菌细胞的方法麻烦些,但测定的值更接近于真实含量。参考文献表2不同浓度NaOH处理BSA后两种测定方法的结果〔l〕[2〕乃11刁」勺JJ峥厂L厂LNaOH(mol/L)LowryCBBG25o98.84士0.2198.80士0.1099.26士0.2199.03士0.1590.03士0.1592.67士0.61LowryOH,etal.JBiolChem.1951,193:265.〔日」微生物研究法讨论会编,程先胜等译.微生物学实验法,北京:科学出版社,1981·192·[日〕营原洁·副岛正美著,张旭译.蛋白质的定量法.第二版.北京:农业出版社,1981·108一115·周德庆.微生物实验手册.上海:上海科学技术出版社,1986,352.张龙翔等.生化实验方法和技术.北京:人民教育出版社,1981.165一167·BradfordMMAnalBioehem.1976,72:248一254.刁J工Jes二J幽乃厂IL广L综上所述可见,即先将细菌细胞破碎,然后再用低浓度(0.lmol/L)Na0H处理细菌样TTC一脱氢酶活性测定法的改进牛志卿刘建荣吴国庆(太原工业大学市政与环境工程系,太原。30024)摘要以紫色非硫光合细菌、枯草芽袍杆菌为材料,改进了TTC一脱氢酶活性的测定方法。在该法中样品不需处理,在常温下用三氯甲烷代替丙酮萃取,液一液分层效果好,显色稳定但不褪色。对测定中的诸多影响因素也作了研究,确定了改进后的脱氢酶活性测定的最佳条件。关镇词脱氢酶,脱氢酶活性,紫色非硫光合细菌,枯草芽抱杆菌废水生物处理及活性污泥消化的实质,是经微生物所产生的多种酶催化一系列的生物氧化还原反应。其中,脱氢酶能使被氧化有机物的氢原子活化并传递给特定的受氢体。因而,脱氢酶的活性可以反映处理体系内活性微生物量及其对有机物的降解活性,以评价降解性能。也可应用该酶活性做为检测金属对活性污泥的毒性指标。因此,脱氢酶活性的检测在废水生物处理中甚为重要。测定脱氢酶的方法很多卜3〕,目前应用较多的是氯化三苯基四氮哇(TTC)法[’j。该法主要选用无色的TTC做为人为受氢体,受氢后生成深浅不同的红色三苯基甲腊(TF)。原法用丙酮作为TF的萃取剂,溶液显色不稳定,易褪色。采用三氯甲烷代替丙酮在常温下进行萃取,操作条件简单,易掌握,经济实用。1材料与方法1.1材料1.1.1菌种:紫色非硫光合细菌(Purplenonsulfurphotosyntheti。Baeteria简称PSB)由本组分离筛选。枯草芽袍杆菌(Baclassu占tizi:简称B.s)由山西医学院提供。1.1.2培养基:YP培养剂川或修改后的van1993一04一15收稿DOI:10.13344/j.microbiol.china.1994.01.0171994年21(l)微生与0.smol/LNaOH处理样品后,两种方法测定的结果都与样品中所含实际蛋白量接近,而用1·omol/LNaOH处理后测得的值则偏低。NaOH的浓度过高时测得的蛋白含量偏低,其原因需进一步探讨。物学通报品,以Lowry法测定细菌总蛋白含量,虽然比通常采用1.omol/LNaOH直接处理细菌细胞的方法麻烦些,但测定的值更接近于真实含量。参考文献表2不同浓度NaOH处理BSA后两种测定方法的结果〔l〕[2〕乃11刁」勺JJ峥厂L厂LNaOH(mol/L)LowryCBBG25o98.84士0.2198.80士0.1099.26士0.2199.03士0.1590.03士0.1592.67士0.61LowryOH,etal.JBiolChem.1951,193:265.〔日」微生物研究法讨论会编,程先胜等译.微生物学实验法,北京:科学出版社,1981·192·[日〕营原洁·副岛正美著,张旭译.蛋白质的定量法.第二版.北京:农业出版社,1981·108一115·周德庆.微生物实验手册.上海:上海科学技术出版社,1986,352.张龙翔等.生化实验方法和技术.北京:人民教育出版社,1981.165一167·BradfordMMAnalBioehem.1976,72:248一254.刁J工Jes二J幽乃厂IL广L综上所述可见,即先将细菌细胞破碎,然后再用低浓度(0.lmol/L)Na0H处理细菌样TTC一脱氢酶活性测定法的改进牛志卿刘建荣吴国庆(太原工业大学市政与环境工程系,太原。30024)摘要以紫色非硫光合细菌、枯草芽袍杆菌为材料