七株聚丙烯酰胺降解菌对PAM的降解性能评价_佘跃惠

每次15mL,合并上层硫酸溶液,用浓氨水调pH值至9-10,再用氯仿提取5次,每次20mL,合并下层氯仿滤液,旋转蒸干,得白色晶体。酶浸法:取5g马钱子粉,加入含0.5g纤维素酶300mLpH4.5柠檬酸-柠檬酸纳缓冲溶液,50℃浸泡16h,过滤,滤液用含10mL氨水的氯仿萃取3次,合并氯仿液,用硫酸(3※100)提取5次,合并上层硫酸溶液,用浓氨水调pH值至9-10,再用氯仿提取5次,合并下层氯仿滤液,旋转蒸干,得白色晶体。1.2.4对照品溶液和样品溶液的制备分别称取士的宁对照品和两种方法提取的产品,分别加入乙酸乙酯制成溶液,作为对照品溶液(0.392mgmL)和样品溶液(0.4012mgmL、0.4007mgmL)。分别吸取4μL对照品和过滤的样品液注入液相色谱仪,得到色谱图,如图1。1.2.5线性关系考察分别吸取对照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μL进样。在上述色谱条件下进行峰面积测定,以峰面积(A)为纵坐标,以进样量为横坐标,进行线性回归,回归方程y=794276x-13673(y峰面,x质量)r=0.9997,士的宁在0.784～3.92μg之间线性关系良好。1.2.6精密度实验:精密吸取对照品溶液4μL,重复进样5次,测得峰面积RSD=0.52%。1.2.7重复性实验:按供试品处理方法平行制备5份样品液,用相同方法测定士的宁含量,其RSD=1.87%。1.2.8回收率实验:准确称取0.1g样品,分别加入适量对照品,并按供试品处理方法制备,相同方法测定。结果见表1。表1士的宁回收率实验结果编号已知量(mg)加入量(mg)实测值(mg)回收率(%)11.75011.83.472795.721.71321.83.6248106.231.75251.83.521998.31.2.9浸提时间对马钱子生物总碱提取率的影响在提取马钱子生物总碱的过程中,在50℃温度、pH4.5和一定酶量条件下,考察了不同时间下酶浸法提取、重量差减法得出马钱子生物总碱的收率,其结果见表2。表2不同浸提时间对马钱子生物总碱收率的影响酶浸提时间(h)12244872产率(%)1.982.512.862.851.2.10不同提取方法士的宁的含量将测得的样品峰面积代入回归方程,可计算出两种方法提取的士的宁含量,重量差减法得出生物总碱的百分含量,结果见表3。表3马钱子中士的宁百分含量成分士的宁(%)生物总碱(%)酶浸法1.832.85氯仿法1.321.86图1士的宁对照品、样品的HPLC色谱图A.对照品色谱图;B.氯仿法提取样品色谱图;C.酶浸法提取样品色谱图(a.士的宁色谱峰)2结果与分析生物碱提取的产率与实验条件和操作方法有关,实验是在0.5g的酶、pH4.5值和50℃温度条件下,进行不同时间的酶浸法提取马钱子生物总碱的尝试。用酶浸法提取马钱子的生物总碱比氯仿法提取的生物总碱提高了0.99%,士的宁的含量也提高了0.51%,且缩短了提取时间。在中医治疗过程中,马钱子生物总碱的各种成分是综合作用的结果。用纤维素酶促使生物总碱浸出的同时,士的宁的含量增加,其它组分也增加。在马钱子诸多成分中士的宁的毒性最大,是马钱子中毒的主要原因。为有效发挥其药效,是否最大限度降低其毒性,控制士的宁的含量,这引起的药理作用的变化究竟如何,有待进一步深入研究。马钱子细胞中有少量的鞣质,它是纤维素酶的天然抑制剂,在提取过程中能使一部分酶活下降。参考文献:[1]蔡宝昌,杨卫贤,袁铸人.马钱与长籽马钱种子中生物碱的含量与分布[J].中药材,1992,5(2):31-32.[2]杨仓良,程方,高绿文,等.剧毒中药古今用[M].第1版.北京:中国医药科技出版社,1995.108-109.[3]马桔云.纤维素酶在盐酸小檗碱提取工艺中的应用[J].中草药,2000,31(2):103-104.[4]李艳霞.应用纤维素酶萃取人参皂甙的研究[J].沈阳农业大学学报,1993,20(增):81-87.七株聚丙烯酰胺降解菌对PAM的降解性能评价佘跃惠1,周玲革1,舒福昌1,张忠智2,刘宏菊3,王家卓3,李向前2(1.长江大学,湖北荆州434023;2.中国石油大学,北京102200;3.北京航空航天大学,北京100083)摘要:研究了从油田产聚合物污水和污泥中分离到的7株聚丙烯酰胺(PAM)降解菌对纯PAM的降解效果。结果表明,PAM微生物降解的过程中,会伴随有pH的降低。由于7株菌组成的微生物群落对PAM的生物降解作用,使得培养基中的PAM的运动粘度从650mm2s降低至100mm2s左右。添加液蜡或酵母膏等导致微生物菌群的共代谢作用,可加快PAM的生物降解。关键词:聚丙烯酰胺(PAM)降解菌;微生物群落;运动粘度;pH值;生物降解中图分类号:X172文献标识码:A文章编号:100