刃天青快速检验乳粉中总菌数的研究_艾玉琴

第7卷1993年第2期黑龙江八一农垦大学学报21月J.ofIleilnogiiangAugustFirstLandReelamatiouVolUniv.7No.2Dee.1993刃天青快速检验乳粉中总菌数的研究艾玉琴关王作洲料张丽萍高玉贤朱玉玲摘要刃天青还原时间的长短与乳粉中的总菌数有关。通过刃天青还原所需时间与总菌数的关系得出一数学模型,即N一501421““。`56“7’。在检验中将刃天青还原所需的时间t代入数学模型即可得知乳粉中的总菌数N。对此数学模型迸行了显著性检验,差异显著(p<0.01)。关键词乳粉刃天青总菌数前言乳粉总菌数的检验是乳粉微生物学检验的一个重要内容。目前,国内和国际上都规定用菌落计数法作为乳粉总菌数的标准检验方法〔1,2,5〕。但菌落计数法操作繁琐,需时长,要谧东求在48h后才能计数总菌落数。而在实际工作中,为减少乳粉的二次污染和乳脂氧化,要求每班生产出的乳粉要在凉粉后及时包装,这就造成在未知乳粉总菌数含量时就已盲目地将乳氛装完毕,而一旦检验出总菌数超标时,就要重破袋改为大包装,打入工业粉。这给乳粉厂带来经济损失,特别是目前都采用复合膜,铝箔袋包装,损失则更大,而且不能及时发现生产中的问题加以纠正。因此,急需找到一种快速、简便、准确可靠的检验方法来代替菌落计数法,以适应生产的需要。美兰还原法与刃天青还原法同是用于检验鲜乳中微生物的一种快速方法,试验研究中,刃天青还原法的还原时间快于美兰还原法,且颜色变化为不可逆性反应。国外自1929年就将刃天青还原法应用于牛乳的卫生质量检验〔3〕,国内也有应用。但用刃天青检验乳粉中总菌数的方法,国内外未有报道,因此我们做了此项研究试验,目的是找到一种快速、简便、准确可靠,对生产有指导作用的乳粉中总菌数计数法。材料与方法1.1材料1.1,:全脂甜乳粉:黑龙江八一农垦大学乳品厂生产。1.1.2刃天青:美国进口,批号R一2127。1.1.3刃天青基础液:含刃天青0.05肠。1.1.4刃天青工作液:用煮沸过的玻璃器皿蒸馏的水,以1:10的比例将基础液稀释,装入茶色瓶中避光保存。1.2仪器设备微生物检验用无菌间;水浴锅、恒温箱、超净工作台,高压灭菌器;火1992一。了一10收稿斧青岛市畜牧一兽医工作站料青岛市畜牧办公室凯德集团公司第7卷第2期艾玉琴等刃天青快速检验乳粉中总菌数的研究菌试管、灭菌吸管、灭菌平皿及三角烧瓶(oomll,50ml)。1.3实验方法1.3.1原理〔4〕:刃天青为氧化还原反应的指示剂,加入到正常鲜乳中呈青蓝色,如果乳中有细菌存在并活动能使刃夭青还原,由青蓝色、紫色一粉红色`白色。因此可根据变色程度和变到一定颜色所需时间推断乳粉中的细菌概数,进而判断乳粉的质量。0H令甄”。帝`”。命’lO刃天青(青蓝色)试卤灵(紫*粉红色)二氢试卤灵(无色)1.3.2试验方法1.3.2。1用托盘天平称取10`乳粉于100ml烧瓶中,加入灭菌生理盐水40ml,配成1:4的乳粉稀释液。1.3.2.2吸取10ml乳粉稀释液于灭菌试管中加刃天青工作液lml,混匀,用灭菌胶塞塞好夕但不要塞严。以上两项操作均为无菌操作。1.3.2.3将试管置于37土0.5℃的水浴锅中进行水浴加热,当试管内的混合物加热到37℃时(用对照组试管测温),将管口塞紧,慢慢转动试管(不振荡)使受热均匀。以后每隔o.sh观察一次试管内颜色变化,并做记录_。,~=It。、、、~。`、一~。,~从二人_、,卜二。。〔5〕小`。t二、,、1.3.2.4用同一乳粉样品做平皿菌落数检验,方法按国标叹u,去做,同时记录。2试验结果2.1乳粉稀释度的选择在正式试验前,分别对乳粉样进行了1:4:5……l:10的稀释,测试结果表明乳粉样以1:4稀释为最佳选择,即此稀释度时刃天青试验还原所用时间最短,所以选择此稀释度。2.2刃天青还原终点的确定刃天青还原的颜色变化规律为蓝色”紫色~粉紫色”粉红色叶白色。由于紫色、粉紫色与蓝色无特别明显区别,不好判定,试验误差大,而还原成白色时所需时间又长,所以选粉红色为判定终点。2.3数学模型的建立乳粉中总菌数(菌落计数法测得)取对数后与刃天青颜色变化所需要的时间之间呈直线关系又见表1)。因此,可以取N一C““’的数学模型(其中N为细菌总数,t为稀释液变为粉红色所需时间,C、K为常数)。将此方程线性化,两边取对数,得:98黑龙江八一农垦大学学报1993年InN=In+CKt令y=InN;A=InC;即y一+AKt用直线回归方程求得参数A~13.1252,K-一0.5637,r二一0.9515,对相关系数r作显著性检验。P<0.01,说明乳粉菌数的对数值与刃夭青乳粉混合液变色所需时间的相关非常显著,且相关的程度为强负相关。表l不同乳粉变色时间一菌数关系表奶粉样序号试验次数变粉色时间总菌数NnIN666