脱氢酶活性检测方法及应用_顿咪娜

［基金项目］山东省自然科学基金项目（Z2006B04）；山东省中青年科学家奖励基金项目（2006BS08001）；山东省环保局项目（hcyf0602）DeterminationofdehydrogenaseactivityanditsapplicationDunMina1，HuWenrong1，2，PeiHaiyan3，XieJun1，4（1.SchoolofEnvironmentalScienceandEngineering，ShandongUniversity，Jinan250100，China；2.ResearchCentreofEnvironmentalScienceandEngineering，Jinan250100，China；3.SchoolofEnvironmentalScienceandEngineering，OceanUniversityofChina，Qingdao266003，China；4.ShandongProvinceEnvironmentalMonitoringCentre，Jinan250013，China）脱氢酶活性检测方法及应用顿咪娜1，胡文容1，2，裴海燕3，解军1，4（１.山东大学环境科学与工程学院，山东济南２５０１００；２.山东省环境科学工程技术研究中心，山东济南２５０１００；3.中国海洋大学环境科学与工程学院，山东青岛266003；4.山东省环境监测中心站，山东济南250013）［摘要］介绍了分别用２，３，５－氯化三苯基四氮唑（ＴＴＣ）以及碘硝基四唑紫（ＩＮＴ）等作为人工受氢体进行脱氢酶活性（ＤＨＡ）检测的几种常见方法，以及它们自身在反映微生物活性等方面的优缺点。论述了ＴＴＣ在ＤＨＡ检测中的发展，重点讨论了ＴＴＣ作为受氢体进行ＤＨＡ测定过程中其标准曲线制作方法的改进，并对测定中诸多影响因素如温度、ｐＨ及萃取剂等进行了比较分析，确定了最佳实验条件。简要概括了目前ＤＨＡ测定方法在废水生化处理、评价化学毒物和金属毒物的毒性、土壤污染等方面的应用。［关键词］脱氢酶活性；2，３，5-氯化三苯基四氮唑；碘硝基四唑紫［中图分类号］TQ085+.41；X131.2[文献标识码]A［文章编号]1005-829X（2008）10-0001-04Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ（ＤＨＡ）ｂｙｕｓｉｎｇ２,３,５－ｔｒｉｐｈｅｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ（ＴＴＣ）ａｎｄｐ－ｉｏｄｏｎｉｔｒｏｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍｖｉｏｌｅｔ（ＩＮＴ）ａｓａｒｔｉｆｉｃｉａｌｈｙｄｒｏｇｅｎ-ａｃｃｅｐｔｅｄｂｏｄｙ,ａｎｄｔｈｅｉｒａｄｖａｎｔａｇｅｓａｎｄｄｉｓａｄｖａｎｔａｇｅｓｉｎｒｅｆｌｅｃｔｉｎｇｍｉｃｒｏｂｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙａｒｅｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ.ＴｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＴＴＣ－ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｉｓｒｅ-ｖｉｅｗｅｄ.ＩｔｓｓｔａｎｄａｒｄｃｕｒｖｅｉｎｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｏｆｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｂｙｕｓｉｎｇＴＴＣａｓｈｙｄｒｏｇｅｎａｃ-ｃｅｐｔｅｄｂｏｄｙｉｓｄｉｓｃｕｓｓｅｄｐａｒｔｉｃｕｌａｒｌｙ.Ａｇｒｅａｔｍａｎｙｏｆｉｎｆｌｕｅｎｔｉａｌｆａｃｔｏｒｓ,ｓｕｃｈａｓｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ,ｐＨａｎｄｅｘｔｒａｃｔａｎｔｅｔｃ.ａｒｅｃｏｍｐａｒｅｄａｎｄａｎａｌｙｚｅｄ.Ｔｈｅｂｅｓｔｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｒｅｃｏｎｆｉｒｍｅｄ.Ｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｉｓｐｒｏｃｅｓｓｔｏｗａｓｔｅｗａｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ,ｔｈｅｃｈｅｍｉｃａｌｐｏｉｓｏｎｓａｎｄｍｅｔａｌｌｉｃｐｏｉｓｏｎｓａｎｄｓｏｉｌｐｏｌｌｕｔｉｏｎａｒｅｓｕｍｍａｒｉｚｅｄｂｒｉｅｆｌｙ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：dehydrogenaseactivity；2，3，5-tripheyltetrazolium；p-iodonitrotetrazoliumviolet第２8卷第10期２００8年10月工业水处理ＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＷａｔｅｒＴｒｅａｔｍｅｎｔＶｏｌ．２8Ｎｏ．10Oct．，２００8近十年来，环境监测的方法和技术不断推陈出新。其中理化分析准确、可靠，但只能测定成分单一的污染物的浓度，因此寻找一种在生命活动中必不可少、具有广泛性的指示物用于环境监测就成为研究的方向。研究生物大分子如酶〔1〕、核酸〔2〕等在污染物作用下结构和功能的改变，已成为研究环境污染的一个重要内容〔3〕。生物处理废水的本质就是酶促反应过程。水中有机污染物在微生物酶的催化下进行氧化分解，无论在废水好氧处理还是在污泥厌氧消化中，基质脱氢（包括脱电子）都