高效液相色谱法1

第二十一章高效液相色谱法第一节概述高效液相色谱法(HighPerformanceLiquidChromat-ography；HPLC)是在60年代末，以经典液相色谱法为基础，引入了气相色谱的理论与实验方法，发展而成的。与经典液相色谱法的主要区别：•流动相改为高压输送•采用高效固定相•具有在线检测器•仪器化等。特点•分离效能高•分析速度快•应用范围广等1高效液相色谱法与气相色谱法应用范围对比高效液相色谱法与气相色谱法应用范围对比气相色谱法虽然也具有快速、分离效率高、用样量少等优点，但它要求样品能够气化，从而常受到样品的挥发性限制。在约300万个有机化合物中，可以直接用气相色谱法分析的仅占20％。对于挥发性差或热不稳定的化合物，虽然可以采取预处理方法，但毕竟增加了操作上的麻烦，且常改变了样品原来的面目，还不易复原。高效液相色谱法分析对象广，它只要求样品能制成溶液，而不须气化。对于挥发性低、热稳定性差、分子量大的高分子化合物以及离子型化合物尤为有利。如氨基酸、蛋白质、生物碱、核酸、甾体、类脂、维生素、抗生素等。分子量较大、沸点较高的有机物以及无机盐类，都可用高效液相色谱法进行分析。2图21－1高效液相色谱仪示意图1．流动相贮瓶2．输液泵3．进样器4．色谱柱5．检测器6．废液出口或至级分收集器7．记录装置8．过滤器高效液相色谱法的优点：①适用范围广②分离性能好③分析速度快④流动杯可选择性范围宽⑤灵敏度高⑥色谱柱可反复使用⑦流出组分容易收集⑧安全。高效液相色谱法与经典液相色谱法对比对比如下表所示4表21－1高效液相色谱法与经典液相色谱法性能对比经典液相色谱高效液相色谱(分析型)固定相一般规格特殊规格固定相粒度(mm)75~5003~20固定相粒度分布(RSD)20%~30<5%柱长(cm)10~1007.5~30柱内径(cm)2~50.2~0.5柱入口压强(MPa)0.001~0.12~40柱效(每米理论塔板数)10~100104~106样品用量(g)1~10107~102分析所需时间(h)1~200.05~0.5装置非仪器化仪器化5第二节高效液相色谱法的分类与基本原理一、高效液相色谱法的分类高效液相色谱法的分类与经典液相色谱法相同。按固定相的聚集状态可分为•液液色谱法(LLC)•液固色谱法(LSC)按分离机制可分为•分配色谱法•吸附色谱法•离子交换色谱法•分子排阻色谱法•亲合色谱法•化学键合相色谱法•胶束色谱法等6HPLCLiquidSolidChromatographyLiquidLiquidChromatography(NormalandReversedphase)IonExchangeChromatography,IonChromatography,Amino-acidAnalysisBondedPhaseChromatography,PairedIonChromatography,IonSuppressionChromatographySizeExclusionChromatography,GelPermeationChromat-ography,GelFiltrationChromatographyAffinityChromatographyMicellarChromatographyChiralChromatography,CyclodextrinChromatographyCapillaryElectrophoresis,HighPerformanceCapillaryElectrophoresis,CapillaryZoneElectrophoresis,MicellarElectrokineticChromatographyCapillaryElectrochromatography,OpenTubularCapillaryElectrochromatography,PackedCapillaryElectrochromatography7