经典液相色谱法2

二、薄层色谱参数二、薄层色谱参数包括定性参数、相平衡参数、分离参数、板效参数和定量参数等。1．比移值(Rf)在薄层色谱法中，一般采用定时展开(定时洗脱)，即观测在同一展开时间内组分与展开剂迁移的距离。组分的迁移距离(l)与展开剂的迁移距离(l0)之比称为比移值(Rf)。Rf=l/l0=u/u0(19·l)在展开后的薄层板上(图19－1)，l是由原点至某组分斑点中心(质量重心)的距离，l0是由原点至展开剂前沿的距离。(一)定性参数定性参数在定时展开的经典薄层色谱中，虽然展开剂的速度随展开距离的增长而下降，但仍可将Rf值看成是在一小段距离内组分迁移速度的平均值(u)与展开剂迁移速度的平均值(u0)之比Rf=u/u0=l/l0由于组分被保留在薄层固定相上，它的迁移速度总是小于展开剂的迁移速度，即u＜u0，组分的迁移距离也总是小于展开剂的迁移距离，即l＜l0，因此，Rf值总是小于1。不被固定相保留组分的Rf值等于1。实践中，Rf值的最佳范围是0.3～0.5，可用范围是0.2～0.8。比移值是薄层色谱的基本定性参数，它说明组分在色谱系统中的保留行为。在实验中需满足下述条件才能获得真实的Rf值：①展开室密闭不泄漏，薄层板周围空间被展开剂蒸气所饱和，无边缘效应②沿分离轨迹，固定相与流动相均无梯度变化③展开剂的前沿位置能正确测定比移值的数值除与组分的性质有关外，还与薄层板的性质(活性等)、展开剂的性质(极性、组成等)和温度有关。在薄层色谱使用的一般条件下，固定相、流动相都不很明确，它们都与蒸汽相一起维持着一种变化的状态，在分离过程中这三相都可能不断在变化。•在使用混合溶剂时，在展开过程中极性较弱、沸点较低的溶剂在薄层板边缘容易挥发，致使边缘部分的展开剂中极性溶剂的比例增大，使Rf值相对变大。同一物质在同一薄层板上出现中间部分的Rf值比边缘的Rf值小，这种现象称为边缘效应。•吸附剂的活化以及有意或无意的不同程度的去活化会改变其色谱行为•由于吸附剂层在被流动相润湿之前吸附蒸汽，空隙率发生了变化，随之流动相的表观速度也变化了。流动相并不是均匀地穿过吸附剂层的。•特别在使用混合流动相时，在色谱过程中当溶剂前缘通过吸附剂层时会造成流动相中的溶剂梯度。即使使用单个溶剂的系统，也会在溶剂前缘的方向表现出杂质的梯度。•在展开过程中还应注意空气中的湿度•温度的变化也影响溶剂的挥发性而影响Rf值和分离效果。2．相对比移值(Rr)由于影响Rf值的因素很多，要在不同实验室、不同实验者间严格控制色谱条件的一致性，达到Rf的可比性很困难。因此建议采用相对比移值(relativeRf；Rr)作为定性参数：Rr=Rf(a)／Rf(s)=la／ls(19·2)式中Rf(a)和Rf(s)分别为组分a和参考物质s在同一薄层板上、同一展开条件下所测得的Rf值，la和ls分别为原点至组分a和参考物质s的斑点中心的距离。