水中粪大肠菌群检测方法的研究

2O16年8月第16期水中粪大肠菌群检测方法的研究张绮纯，刘森林，李燕，林建华(广东省深圳市龙岗区环境监测站，广东深圳518172)摘要：运用多管发酵法和滤膜法对水库水、自来水、井水粪大肠茵群进行了检测，结果表明：多管发酵法检测水样，过程耗时费力。滤膜法检测水样，过程快速简便。两种方法所得检测结果具有可比性，准确可靠。关键词：粪大肠菌群；多管发酵法；滤膜法；比较研究中图分类号：X832文献标识码：A文章编号：1674—9944(2016)16-0109—021引言粪大肠菌群系指在44℃下能生长并发酵乳糖产酸产气的一组微生物。2001年国家卫生部在《生活饮用水卫生标准》的基础上，重新修定颁布了《生活饮用水卫生规范》，新增加了粪大肠菌群为常规必检项目。主要以该菌群的检出情况来表示检样中是否有有机物污染。粪大肠菌群数的高低也预示了其对人体健康危害性的大小。2材料与方法2．1材料乳糖蛋白胨培养基、EC肉汤培养基、M—FC培养基、MilliflexPlusPump过滤器、MILLIPORE滤膜0．45“In、灭菌蒸馏水、超净工作台、高压蒸汽灭菌器，恒温培养箱，恒温水浴箱，移液管、酒精灯、发酵管。采集的水库水、自来水、井水放人冰箱保存，5h内送达实验室检测。2．2方法2．2．1多管发酵法多管发酵法检测粪大肠菌群是指将待测水样按照3个不同的接种量，接种于乳糖蛋白胨培养液中培养，每个接种量5支发酵管，分为初发酵和复发酵两步进行。初发酵试验：将水样充分混匀，水库水、自来水、井水样接种量分别是10mL，1mL和10mL，再分别接种到接种体积为10mL盛有3倍浓度的乳糖蛋白胨培养液的发酵管中，接种量体积为1mL或少于1mL接种到普通浓度的乳糖蛋白胨培养液中，每个接种量样品各接种5只发酵管。将上述发酵管放人37±0．5℃培收稿日期：2016-08—07作者简介：张绮纯(1977一)，女，工程师，主要从事环境监测工作。养箱中培养24±2h。若培养液由原来的紫色变为黄色，则证明产酸；若小倒管产生气泡，则说明产气，对各个管产酸产气阳性情况做好记录。复发酵试验：将初发酵试验阳性发酵管摇匀，用3mm接种环将培养物转接至EC培养液内。在44．5±0．5℃水浴中培养24±2h，(水浴箱的水面应高于试管中培养基液面)，接种后所有EC培养液发酵管比需在30min内放进水浴箱中，培养后立即观察，发酵管产气证实为粪大肠菌群阳性。粪大肠菌结果，根据不同接种量发酵管所出现阳性管数，从粪大肠菌群数测定方法中的粪大肠菌群(MPN)检数表中查得相应的MPN指数，按粪大肠菌群计算方法计算每升水中粪大肠菌群的MPN值。2．2．2滤膜法用经过火焰消毒并冷却的镊子夹取一张过滤膜放在沙滤头上，注意滤膜网格朝上，再取出无菌的漏斗安装到底座上，从漏斗的上边缘按下漏斗使之牢靠的套在底座上。分别取水库水、自来水、井水样100mL，5OmL和10mL，将样品溶液倒人漏斗中，水样倒入后，按下Start键，设备即开始抽滤，过滤完成后，按下Start键自动进入Dryout(抽干)模式。该步骤完成后，取下滤杯，按下拨动杆，用灭过菌的镊子夹住滤膜边缘，将滤膜小心取下来，贴放在M—FC培养基内。将培养皿紧密盖好后，在44．5±0．5oC恒温箱中培养24±2h。粪大肠菌群菌落在M—FC培养基上呈蓝色或蓝绿色，其他非粪大肠菌群菌落呈灰色、淡黄色或无色。计数呈蓝或蓝绿色的菌落，每1L水样中的粪大肠菌群数公式：粪大肠菌群菌落数(L)一滤膜上生长的粪大肠菌群数×1000／滤过的样品量(mL)。参考文献：[1]郭煦，淮河流域污染频发折射流域治理难题EJ]．小康，2015(13)：74～77．[2]杨功焕，庄大方．淮河流域水环境与消化道肿瘤死亡图集EM]．北京：中国地图出版社，2013．E3]夏军，程绪水．淮河流域水环境：综合承载能力及调控对策EM]．北京：科学出版社，2009．[4]曾承，陈玲玲，淮河流域生态修复初探[N]．安徽El报，2015—08—11．[5]余建杰，构建淮河流域生态环境途径的思考I-J3．赤峰学院学报(自然科学版)，2011，27(3)：163—165．1O9张绮纯，等：水中粪大肠菌群检测方法的研究环境与安全3结果与分析3．1精密度和准确度分析精密度和准确度是可信性的基础。多管发酵法对不同水样中粪大肠菌群测定，不同水样相对标准偏差在0．0一5．3之间，属正常范围之内。使用埃希氏大肠杆菌(Escherichiacoli)进行加标回收测定实验，回收率在85一115％之间，表明准确度和精确度满足分析方法的要求。多管发酵法精密度及准确度、滤膜法精密度及准确度的实验结果见表1、表2。表1多管发酵法精密度及准确度实验结果4结论(1)多管发酵法检测不受浊度和浓度的影响适用于任何条件水样的检测，重复间稳定性好，准确度、