电镜宝典

1.电子显微镜的发展德国人Ruska1938年制造出一台真正实用的电子显微镜，其分辨率为10nm，比光镜提高了20倍。由于Ruska在电子显微镜方面作出的巨大贡献，他被誉为电子显微镜之父2.电子显微镜发展的理论基础Broglie的粒子波动性理论Busch的电磁场对电子具有会聚作用的理论3.电子显微镜的类型透射电子显微镜（TEM），扫描电子显微镜（SEM），扫描透射电镜（STEM）分析电子显微镜（AEM），高压电子显微镜（HVEM），扫描隧道显微镜（STM）原子力显微镜（AFM）4分辨率和有效放大倍数的关系M有=δ人眼/δ仪5影响分辨率的因素6电子束的特性电子波的波长和加速电压、分辨率的关系加速电压越高，波长越长7电子束与样品的相互作用透射电子（TE）、二次电子（SE）、背散射电子（BE）俄歇电子（AE）、X射线等电子信号的用途1.透射电子显微镜的结构电子光学系统（镜筒）、真空系统和电子学系统2.电子光学系统的组成和作用：1、照明系统（电子枪、聚光镜等）2、样品室3、成像放大系统（物镜、物镜光栏、中间镜、投影镜等）4、观察记录系统（观察室、照像装置、CCD等）3.成像原理振幅反差、相位反差、离焦反差衍射反差4.工作原理电子枪产生高能电子束--聚光镜控制光斑的大小和亮度--电子轰击样品--物镜聚焦透射电子--中间镜和投影镜放大--在荧光屏上将电子信号转成可见光形成图象5.提高生物样品图像反差的方法（5种）a，用金属盐来染色，以增加样品某些结构的质量厚度B，用重金属投影喷镀C，电镜观察中使用物镜光阑可以提高图像的反差，光阑越小，图像反差越强。D.降低加速电压。E.利用暗场显微方法。1.超薄切片超薄切片制样的一般程序如下：制样的一般程序如下：取材，醛类固定，缓冲液清洗，锇酸固定，缓冲液清洗，梯度脱水，环氧丙烷置换，浸渍，包埋Epon812，聚合（60°C），修块和超薄切片，铀染色，铅染色2.取材的原则和基本要求1、取材部位要准确2、取材要迅速3、取材时的温度4、材料的体积要小5、取材时避免损伤3.常用固定剂种类及其性能------醛类、锇酸、高锰酸钾4.固定过程中需要注意的问题A.固定液的PH值B.固定液的浓度C.固定液的渗透压和离子组成D.固定液的温度和时间E.固定材料的大小5.电子染色剂的种类及其特性-------醋酸铀、柠檬酸铅，高锰酸钾，磷钨酸6.电子显微镜x射线微区分析技术制样方法A.对于生物硬组织，首先对其表面进行清洁，干燥处理，然后真空中喷镀200-400Ao厚的碳膜。B.对于悬浮液中的样品，可用涂片或喷协和的方法分散在支持物上，在进行空气干燥。C.含水较多的生物样品的制备通常使用冷冻干燥的方法来处理。1.负染色技术:通过重金属盐在样品四周的堆积提高样品外围的电子密度，衬托出样品的形态和大小。由于在电镜观察时，生物结构部分为透亮的，图像为负片，故称负染色2.负染色技术特点：具有分辨率高（可达20A°）、简单方便、快速的优点3.负染色剂具有不同的染色特性------磷钨酸（PTA）、醋酸铀等4.负染色的操作方法-------悬滴法、漂浮法、喷雾法5.影响负染色效果的主要因素（5点）A.样品的凝集问题B.样品的浓度和纯度C.样品悬液和复染液的酸碱度D.染色操作方法的影响E.镜检操作观察6.金属投影技术的特点：用这种技术制成的样品，因投影的效果，电镜下观察样品图像富有立体感，而且样品耐电子轰击。7.冷冻制样技术：利用低温冷冻方法处理样品的物理制样技术8.优点和缺陷：操作步骤少，时间短，适用于快速研究及诊断。操作技术难度大，成本较高。9.冷冻制样技术包括：冷冻真空干燥技术，冷冻取代技术，冷冻超薄切片技术，冷冻断裂蚀刻复型技术10.冷冻保护剂及作用：降低细胞内的含水量或提高细胞内液的浓度，从而缩小冷冻点与再结晶点之间的温度差。1.负染色技术:通过重金属盐在样品四周的堆积提高样品外围的电子密度，衬托出样品的形态和大小。由于在电镜观察时，生物结构部分为透亮的，图像为负片，故称负染色2.负染色技术特点：具有分辨率高（可达20A°）、简单方便、快速的优点3.负染色剂具有不同的染色特性------磷钨酸（PTA）、醋酸铀等4.负染色的操作方法-------悬滴法、漂浮法、喷雾法5.影响负染色效果的主要因素（5点）A.样品的凝集问题B.样品的浓度和纯度C.样品悬液和复染液的酸碱度D.染色操作方法的影响E.镜检操作观察6.金属投影技术的特点：用这种技术制成的样品，因投影的效果，电镜下观察样品图像富有立体感，而且样品耐电子轰击。1.扫描电镜的电子光学系统电子枪，灯丝对中线圈，聚光镜，扫描线圈,物镜及其光阑，消像散器，样品室2.扫描电镜的工作原理流程1、电子枪发射高能电子束聚光镜会聚，2、形成电子探针在偏转线圈作用下，3、电子探针作x、y扫描运动在