测定总氮时影响空白吸光值的因素

中国饲料2011年第4期基金项目：国家科技支撑计划项目（2008BADB4B04-4）；辽宁省教育厅项目（L2010256）目前多糖的分离仍是比较活跃的研究领域，但对多糖检测条件的研究报道不多。多糖的检测通常采用比色法，影响比色的因素主要有糖的浓度、显色试剂的量、反应温度及反应时间等。故本文将反应时间、反应温度、蒽酮-硫酸的体积作为考察因素，检测各因素不同水平对标准糖吸光度值的影响，正交实验优化蒽酮-硫酸比色法最佳的检测条件。1仪器与药品UV-757CRT分光光度计，上海三精科有限公司；FA2004N型电子天平，上海精密科学仪器有限公司；半乳糖、葡萄糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、鼠李糖6个标准单糖，蒽酮、硫酸均为分析纯。2方法与结果2.1葡萄糖标准溶液的配制准确称取105℃干燥至恒重的葡萄糖100mg，混匀后用蒸馏水溶解并定容至100mL。2.2总标准糖溶液的配制精密称取105℃干燥至恒重的半乳糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖、木糖、鼠李糖各10mg，混匀后用蒸馏水溶解并定容至200mL。2.3蒽酮-硫酸的配制称取蒽酮0.66g，浓硫酸100mL，完全溶解后，置棕色瓶内现配现用。2.4测定条件选择2.4.1反应温度选择精密吸取葡萄糖标准液10mL于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，配成100μg/mL的标准溶液，以吸光度值（OD值）较高者作为选择指标。分别吸取标准溶液0.5mL5份，于具塞试管中，加水至1.0mL，各加蒽酮-硫酸液4.0mL，并分别于20、40、60、80、100℃水浴中恒温10min取出，冷却至室温，于620nm处测其OD值，分别为0.552、0.648、0.682、0.779、0.861。因此，本实验采用反应温度的3个水平为60、80℃和100℃。2.4.2蒽酮-硫酸用量选择吸取标准溶液0.5[摘要]本研究通过单因素实验和L9（33）正交实验优化蒽酮-硫酸比色法检测多糖含量的条件，研究反应温度、反应时间、蒽酮-硫酸液的体积对吸光度值的影响。结果表明，蒽酮-硫酸比色法检测的糖含量的最优条件为蒽酮-硫酸2mL，于100℃反应10min。验证实验结果表明，总标糖获得的标准曲线方程A=0.005W-0.0162，r=0.9998，优于葡萄糖标准曲线方程。在620nm下测定，能得到较高的吸光度值，重现性好。[关键词]蒽酮-硫酸；多糖；比色法；优化；吸光度值[中图分类号]S816.17[文献标识码]A[文章编号]1004-3314（2011）04-0039-03[Abstract]Inordertooptimizereactionconditionsofanthrone-vitriolcolorimetricmethodondetectedpolysaccha-ride，singlefactortestandorthogonalexperimentdesignmethodsL9（33）wereappliedtoanalyzetheinfluenceofthefac-torssuchasreactiontemperature，reactiontimeandanthrone-vitriolvolumeontheabsorptanceofthesaccharides.Resultsshowedthattheoptimumanthrone-vitriolvolumewas2mL，reactiontemperaturewas100℃，reactiontimewas10min.Andverificationtestshowedthatthestandardcurvilinearequationofmixedstandardsaccharides（A=0.05W-0.0162，r=0.998）wasbetterthansinglestandardsaccharide.Inthisreactioncondition，theabsorptanceofthesamplewashigherun-der620nm，andtheresultswerereproducible.[Keywords]anthrone-vitriol；polysaccharide；colorimetricmethod；optimization；absorptance蒽酮-硫酸比色法检测多糖条件的优化吉林大学王宏军邓旭明辽宁医学院蒋红周铁忠常叁明检测分析39中国饲料2011年第4期mL5份，加水至1.0mL，分别加入蒽酮-硫酸液2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL，100℃恒温10min后，测其OD值，分别为0.948、0.916、0.709、0.446、0.421，可见随着蒽酮-硫酸体积的增多，其吸光度值呈下降趋势。因此，本实验采用蒽酮-硫酸液的反应体积的3个水平为