Burkholderia_Vie_省略_miensis对水中结晶紫的降解_程迎

印染废水成分较复杂，具有有机物含量高、色度高、具有抗氧化、抗生物降解等特点，因此，其脱色成为近年来染料废水处理过程中面临的主要问题之一[1-3]。近年来，随着纺织品需求的增加，纺织废水也成比例的增加，因此印染废水对环境的污染也越发严重[4]。三苯基甲烷类染料是一类色度高、难降解的染料，结晶紫属于三苯基甲烷类染料，具有抗菌作用，可与甲基紫混合后组成常用于皮肤、黏膜消毒的龙胆紫。有些养殖场将结晶紫加到家畜饲料中用来控制真菌的生长霉变，但有研究指出，龙胆紫残留物可在畜禽体内存在相当长的时间，并且这些物质对细胞有丝分裂具有强生物毒性[5]。结晶紫具有高残留、高生物毒性和致癌、致畸、致突变等作用，会威胁人体健康，造成潜在的环境危害，因此结晶紫等三苯基甲烷类染料的脱色降解研究对于治理染料污染具有重要的理论意义和实用价值。本文通过筛选和富集培养，从印染厂的活性污泥中筛选分离出一株可降解结晶紫的菌，并初步研究了该菌株对结晶紫的脱色降解效果以及菌株降解结晶紫所需的最适条件。目前已报道的降解三苯甲烷类染料的微生物主要是白腐菌真菌[6]、放线菌[7]及藻类[8]等，用细菌降解的报道相对较少。因此，筛选分离新的三苯甲烷类染料降解菌对于理解其生物降解机理以及处理实际废水都具有积极意义。本文分离筛选了一株对结晶紫具有优良脱色能力的菌株,对其进行了生理生化试验和16SrRNA基因序列鉴定，初步研究了菌株降解结晶紫所需的最适条件以及菌株对实际废水的脱色降解，丰富了染料废水降解脱色的微生物资源，为染料废水中降解脱色问题的解决提供了理论资料。1试验部分1.1试验材料1.1.1菌株编号C09V，样品采集于福州市某印染厂污水处理池污泥中。1.1.2培养基LB培养基（g·L-1）：酵母膏5，蛋白胨10，氯化钠10；无机盐培养基（g·L-1）：KH2PO41.8，Na2HPO4·12H2O3.5，FeCl3·6H2O0.01，MgSO40.1，结晶紫0.03，碳源，氮源，视需要添加；固体培养基：液体培养基中加入2%琼脂。1.1.3主要试剂和仪器722N型可见光光度计；生化培养箱（SPX-2508-Z型）；立式双层恒温培养摇床（SKY-2102BurkholderiaVietnamiensis对水中结晶紫的降解程迎，甘莉，陈祖亮（福建师范大学化学与材料学院，福建福州350007）摘要：从福州某印染厂活性污泥中分离筛选出1株对结晶紫染料有强脱色能力的菌株，根据其形态学特征和生理生化鉴定以及16SrRNA基因序列分析，鉴定为BurkholderiaVietnamiensisC09V。在振荡培养条件下对该菌株的脱色降解特性进行了研究，结果表明，菌株C09V的最佳碳源为葡萄糖；最佳氮源为KNO3；最适脱色初始pH为5.0；最佳菌投加体积分数为5%；最适脱色温度为35℃；在最适脱色条件下脱色36h，该菌株对30mg·L-1结晶紫脱色率可达到96.5%。关键词：BurkholderiaVietnamiensis；结晶紫；生物降解；脱色中图分类号：X703.1文献标识码：A文章编号：1000-3770(2011)10-0046-004收稿日期：2011-06-09基金项目：福建省发改委项目基金（UE0021)；福建师范大学闽江学者人才引进基金（200604）作者简介：程迎（1986－），女，硕士研究生，研究方向为废水处理；联系电话：15980282794；E-mail：chengyingcy@gmail.com第37卷第10期2011年10月水处理技术TECHNOLOGYOFWATERTREATMENTVol.37No.10Oct.,201146DOI:10.16796/j.cnki.1000-3770.2011.10.013型）；XSP-8CA生物显微镜；PHS-3C型精密pH计。1.2试验方法1.2.1菌株的筛选及分离纯化称取10mL污泥置于结晶紫浓度为10mg·L-1的液体培养基中，于30℃、150r·min-1的恒温摇床中培养数日，取样测定结晶紫的含量。待浓度降低后，取0.1mL培养液于新培养基中，待结晶紫降解率趋于稳定后逐步加大培养液中结晶紫的含量，至结晶紫含量为150mg·L-1。取1mL菌液用无菌水稀释107倍，取0.1mL均匀地涂布于含有染料的固体生长培养基上，置于30℃的恒温培养箱中培养2d。将多次富集培养后得到的液体培养基接种于含结晶紫的固体培养基上划线分离，通过比对菌落的形态、颜色、大小等，将不同形态的单菌落分别挑取并进行复筛，最终将经4～5次分离纯化后得到的单菌株重新接种培养，菌种置于-40℃冰箱保存。1.2.2菌株鉴定菌体形态为短杆状，无鞭毛，不运动，有荚膜；革兰氏染色阴性。菌落为白色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润。PCR扩增程序：95℃预变性5min；94℃