微生物荧光原位杂交-FISH-实验技术-陈瑛

第40卷第4期2008年4月哈尔滨工业大学学报JOURNALOFHARBININSTITUTEOFTECHNOLOGYVol140No14Apr.2008微生物荧光原位杂交(FISH)实验技术陈瑛1,2,任南琪1,李永峰1,程瑶1(1.哈尔滨工业大学市政环境工程学院,哈尔滨150090;2.哈尔滨师范大学生物系,哈尔滨150080,E-mai:lchenyinglady@yahoo.com.cn)摘要:为更好地应用荧光原位杂交(FISH)实验进行微生物群落生态研究工作,对FISH实验原理和影响FISH实验结果准确性的主要因素进行分析和讨论,包括寡核苷酸探针的选择与标记、样品的预处理、杂交液和杂交条件的选择等步骤.总结了一些实验心得,提出关键步骤的操作要点和注意事项,以及FISH技术与其他实验手段相结合的发展前景.建议根据不同检测对象和实验目的,对关键步骤进行改进可以提高实验准确性、简化操作和降低成本.关键词:微生物生态学;环境微生物;荧光原位杂交;寡核苷酸探针中图分类号:Q93文献标识码:A文章编号:0367-6234(2008)04-0546-04Microbiologyexperimentoffluorescenceinsituhybridization(FISH)techniqueCHENYing1,2,RENNan-qi1,LIYong-feng1,CHENGYao1(1.SchoolofMunicipalandEnvironmentalEngineering,HarbinInstituteofTechnology,Harbin150090,China;2.Dept.ofBiology,HarbinNormalUniversity,Harbin150080,China,E-mai:lchenyinglady@yahoo.com.cn)Abstract:InordertostudytheecologyofmicrobialcommunitiesbyapplyingFluorescenceinsituhybridiza-tion(FISH)technique,thispaperanalyzedtheprincipleofFISHandtheinfluencingfactorsoftheexperimen-talaccuracy.Thesefactorsincludechoosingandmarkingtheoligonucleotideprobes,pretreatingthesamples,andchoosingthehybridizingsolutionandhybridizingconditions.Theexperimentalresultsweresummarizedandthemainoperationpointsofkeyproceduresweresuggested.ThefutureofFISHcombiningwithothertechniqueswasexpected.Thispapersuggeststhattheincreaseoftheaccuracy,thesimplificationoftheproce-dureandthedecreaseofthecostcanbeachievedbyimprovingkeyproceduresaccordingtodifferentsamplesandresearchinggoals.Keywords:microbialecology;environmentalmicroorganism;fluorescenceinsituhybridization(FISH);ol-igonucleotiedprobe收稿日期:2006-03-17.基金项目:国家杰出青年科学基金资助项目(50125823);国家重点基础研究发展计划资助项目(G2000026402).作者简介:陈瑛(1972)),女,博士;任南琪(1959)),男,教授,博士生导师,长江学者特聘教授.1969年,Pardue[1]和John[2]两个研究小组建立了原位杂交技术(ISH),这一技术可以在保持细胞形态完整性的条件下,检测出细胞内特定核酸序列,即采用DNA或RNA探针,通过原位杂交的方法,将特定的DNA或RNA序列在细胞或染色体上显示出来.最初是采用同位素标记的方法,通过放射自显影,将已结合在靶位上的探针显示出来.后来改进了标记的材料,用包括荧光酶、地高辛、生物素等荧光物质代替了同位素,从而形成了荧光原位杂交(FISH)技术.荧光物质的使用提高了分辨率,简化了检测步骤,增强了安全性,为同时检测不同的探针提供了可能,从而发展出了多重原位杂交,并被广泛应用.1988年,Giovan-noni等[