生物表面活性剂产生菌的分离与鉴定-精灵论文

生物表面活性剂产生菌的分离与鉴定左豫虎，毕思宁，侯巨梅，刘铜（黑龙江八一农垦大学农学院，黑龙江大庆163319）摘要：采用富集培养、传代培养、血平板、油平板等方法从270份大庆油田的油土样中初步筛选出10株潜在的产生物表面活性剂菌株，通过进一步的排油法和乳化性能（E24）复筛获得一株产生生物表面活性剂的优良菌株。对该菌株的生理生化特征、菌体和菌落形态学特征分析，并结合16SrDNA测定，表明该菌株属于假单胞菌属（Pseudomonassp.），命名为假单胞杆菌BS1。关键词：应用微生物学；生物表面活性剂；血平板；乳化性能；假单胞杆菌属中图分类号：Q939.99;O647.2IsolationandIdentificationofMicrobeProducingBiosurfactantZuoYuhu,BiSining,HouJumei,LiuTong(CollegeofAgronomy,HeilongjiangBayiAgriculturalUniversity,HeiLongJiangDaQing163319)Abstract:Tenisolateswereisolatedfrom270Daqingoil-contaminatedsoilsbyenrichmentculture,subculture,hemolyticactivityassayonbloodagarplates,hydrolyzingoilactivityonoilagarplates.Thenthefermentationofthefirstisolatedstrainsweresecondlysecreenedbyandtheemulsificationindex,Oneisolateaspotentialbiosurfactantproducerwasobtainedbydegreasingoilassayandtheemulsificationindex(E24).ThisisolatewasidentifiedasPseudomonasproducingbiosurfactantspBS1basedonitsphysiologicalcharacteristicsandanalysisofits16SrRNAsequence.Keywords:appliedmicrobiology;biosurfactant;hemolyticactivityassay;emulsificationindex;Pseudomonas0引言生物表面活性剂（Biosurfactant）是从生物来源分离得到的一类具有降低表面张力、稳定乳化、增加泡沫稳定性等表面特性的物质，通常有亲水基和亲油基两部分。生物表面活性剂的表面活性与化学合成的表面活性剂相当，但具有可生物降解的优点、对环境友好、相容性好、起泡性能强，甚至在极端的生存条件下仍能保持良好的选择性和专一性。因此在石油工业、环境工程、农业、食品药品等领域都显示出了独特的应用前景[1]。筛选产表面活性剂性能优良的菌株是获得和应用生物表面活性剂的关键步骤，因此本实验以大庆石油污染土壤为分离源，拟分离出产生物表面活性剂的菌株，并对其进行菌种鉴定，为进一步运用研究奠定基础。1材料与方法1.1土壤样品采集选择大庆90个有代表性的加油站或油井旁边进行土壤采样，其分布宜尽量照顾到大庆地区不同石油污染土壤。在确定的采样点上，先用小土铲去掉表层3cm左右的土壤，然后倾斜向下切取一片片的土壤，按需要的量装入袋中带回。每个采样点取3个土样，共270份土样，用牛皮纸袋装好，作好标签。基金项目：教育部高等学校博士点科研基金（200802230001)；黑龙江省教育厅基金(5040299310242)资助。作者简介：左豫虎，（1965-），男，教授，主要研究方向：应用微生学和植物病原真菌学与植物真菌病害.E-mail:zuoyhu@163.com1.2菌株筛选1.2.1富集培养将油土样按5%的接种量分别接种到富集培养基中[2]，于37℃、180r/min条件下振荡培养。1.2.2传代培养当富集培养液变浑浊后，按5%的接种量接种到传代培养基中（与富集培养相同），于37℃、180r/min条件下进行传代培养，直至菌株稳定。1.2.3油平板筛选将富集培养液划线接种于以原油为唯一碳源的油平板上[3]，于37℃保温保湿培养3~4d。只有产生表面活性剂能够乳化碳氢化合物的菌株才能吸收利用石油形成噬油斑，然后挑选出有噬油斑的菌落接种于斜面上，37℃条件下培养24h后，于4℃冰箱保存。1.2.4血平板筛选采用平板划线法将有噬油斑的菌落菌株接种于血平板上[4]，于37℃恒温培养箱中培养24~48h，然后挑选溶血圈大且透明的单菌落划线接种于斜面上，37℃条件下培养24