溶藻微生物的研究方法

收稿日期:2004-09-07基金项目:河北农业大学水产学院科研基金资助.作者简介:安鑫龙,1976年生,男,河北唐县人,硕士,讲师,主要从事生物学教研工作。溶藻微生物的研究方法安鑫龙1,李豫红2,赵艳珍2,袁春营2(1河北农业大学水产学院水域环境保护与监测系,河北秦皇岛066003;2河北农业大学水产学院水产养殖系,河北秦皇岛066003)摘要:从溶藻微生物的获得方法、纯化和溶藻方式等3个方面进行了介绍,希望能对我国的水产养殖业和环境科学事业的发展起到积极的促进作用。关键词:溶藻微生物;纯化;溶藻方式中图分类号:S932.7文献标识码:A文章编号:1003-1278(2005)02-0017-02在湖沼和海洋中,许多藻类可以形成水华和赤潮,从而影响和改变水的理化性质,并且能够直接或间接对食藻动物产生危害甚至致死,这些藻类我们称为有害藻类。有害藻类主要有蓝藻类的铜绿微囊藻、水华微囊藻、鱼腥藻以及丝状绿藻等。有害藻华的爆发随着全球水体富营养化的加剧而日趋频繁,对水产养殖业将产生巨大的潜在危害。近年来,利用微生物防治有害藻类的方法逐渐得到重视,即我们所说的利用溶藻微生物来防治有害藻类。溶藻微生物主要包括细菌、真菌、病毒和放线菌等,目前研究较多的还是溶藻细菌。近年来有关溶藻微生物的报道日益增多,但是还没有见到其有关研究方法的专著或系统介绍,因此,笔者通过自己的实践并查阅了一些相关资料来简单介绍一下如何对溶藻微生物进行系统研究,以达到抛砖引玉之目的。1溶藻微生物的获得方法1.1获得溶藻微生物的可行性方法1.1.1原位取样分离即在有害藻华爆发水域待有害藻类衰退时或衰退后即时取样,送回实验室进行分离鉴定。1.1.2异位取样分离即在有害藻华爆发水域外其它水域取样,送回实验室进行分离鉴定。这种方法目前应用比较广泛。如彭超等[1]从武汉市的4个池塘采回14批水样,成功地分离到3株溶藻细菌,它们分别能溶解中国科学院水生生物研究所藻种保藏中心提供的念珠藻、鱼腥藻、铜绿微囊藻、鞘丝藻等多种蓝藻。1.1.3生物工程手段即利用现代生物技术(基因工程)构建溶解某种有害藻类的工程菌株。这种方法虽然目前还没有见到报道,但是在植物病害和虫害生物防治中早已有相关报道,并且有的已得到广泛应用。因此,随着现代生物技术的日益发展,生物工程菌必将成为溶藻微生物的重要组成部分。1.2溶藻微生物获得方法的优缺点1.2.1原位取样分离法优点:方法比较简单;缺点:一是工作量大;二是随机性强,即爆发有害藻华水域的有害藻类衰退的主要原因应该是出现了大量溶藻微生物,这样分离得到溶藻微生物的效率应该是很高的,若有害藻类衰退的主要原因是其它方面,则原位取样分离法将不再有效;三是时效性强,即应在溶藻微生物出现或大量出现时进行取样,这样将分离到有效的溶藻微生物。1.2.2异位取样分离法优点:方法比较简单;缺点:一是工作量很大,二是随机性强,即水样批次尽量充足,取样批次少时可能根本就分离不到溶藻微生物,三是不一定把水样中的全部溶藻微生物分离出来或者分离出来的只是起次要作用的溶藻微生物,这与工作人员的经验和所用培养基密切相关,这一点也是原位取样分离法同样存在的问题。1.2.3生物工程手段优点:构建的生物工程菌株选择性强;缺点:一是要求分离工作人员掌握一定的分子生物学和生物技术等较专业的知识和熟练的操作技能,二是费用比较昂贵。2溶藻微生物的纯化溶藻微生物分离以后,如果分离样品和操作都很好,不难得到纯培养。但是,由于微生物种类较多,包括细菌、真菌、病毒和放线菌等等,因此,即使分离步骤很严格,对于不同种类的微生物,我们也应该对其进行纯化,以期望得到纯种。2.1细菌的纯化2.1.1分离效果分离培养后,我们可根据细菌菌落特征来判断分离效果如何。如果菌落的类型很多,且分不清主次,则很可能没有分离到目标细菌,或即便存在目标细菌,也早已与它菌混杂。如果认为分离效果很差,应考虑重新分离。如果分离结果较好,则琼胶平板上菌落的形状和大小比较一致,即使出现几种不同形状的菌落,总有一种是主要的。如果我们不熟悉目标细菌菌落的特征,应该选择几种不同类型的菌落,分别培养后回接供试藻种,来判断目标细菌。2.1.2细菌纯化通过上述3种情况的判断后,选择目标细菌进行纯化,通常采用的方法如下。2.1.2.1单孢培养纯化法无菌操作挑取目标细菌菌·71·2005年第25卷第2期水利渔业(总第138期)落少许,在琼胶平板表面划线形成单孢可得到纯种。另外一种方法是配制目标细菌的悬浮液,通过稀释培养而得到单孢纯种。2.1.2.2过滤法选择一定孔径的滤膜过滤目标细菌悬浮液得到纯培养的方法。2.1.2.3显微操作器分离纯化法显微操作器实质上是一种“机械手”,代替手来作各种显微镜下的操作。由于细菌很小,所需的琼胶培养基要洁净才能看清和挑到细菌。2.2真