海洋真菌多不饱和脂肪酸的快速检测

海洋真菌多不饱和脂肪酸的快速检测Ξ卞曙光张晓昱张磊ΞΞ黄开勋(华中理工大学化学系武汉430074)摘要:从海水中分离了一种产EPA和DHA的真菌,并建立了微生物油脂的快速提取、甲酯化及其多不饱和脂肪酸的含量的气相色谱测定方法。结果表明:采用CHCl32KOH2CH3OH一步提取甲酯化适合于产多不饱和脂肪酸菌株的快速检测。对其油脂的提取,采用湿菌丝魏氏盐酸水解法较为合适;并用KOH2CH3OH法对所得油脂进行了甲酯化。最后,运用毛细管气相色谱采用外标法测定了甲酯化样品中多不饱和脂肪酸的含量,其油脂中EPA和DHA的含量分别为7132%和7158%。关键词:多不饱和脂肪酸,EPA,DHA,GC中图分类号:O657.71文献标识码:A文章编号:025322654(2001)012073204AFASTDETERMINATIONOFPOLYUNSATURATEDFATTYACIDSPRODUCEDBYMARINEFUNGUS3BIANShu2GuangZHANGXiao2YuZHANGLei33HUANGKai2Xun(Dept.ofChemistry,HuazhongUniversityofSei.&Tech.Wuhan430074)Abstract:AfungusthatiscapableofproducingEPAandDHAwasisolatedfromseawater.Afastextrac2tionandmethylesterificationofmicrobiallipidwereestablishedaswellastheircontentdeterminationbycapillarygaschromatographyusingexternalcalibrationmethod.TheresultsshowedthatthemethylesterprepareddirectlyformthewetmyceliatreatedwithCHCl32KOH2CH3OHislesstime2consumingandthemethodfitsforthefastdetermination.TodetermineitsEPAandDHAcontent,thewetmyceliawashy2drolyzedaccordingtoWeibul’smethodandthelipidobtainedwasmethylesterifiedwithKOH2MeOH,theresultsobtainedbycapillarygaschromatographyusingexternalcalibrationmethodwere7.32%and7.58%respectively.Keywords:Polyunsaturatedfattyacids,Eicosapentaenoicacid,Docosahexaenoicacid,Gaschromatogra2phy多不饱和脂肪酸(PUFA)是指含有两个或两个以上双键,碳链数在16～22的直链脂肪酸。目前,受到人们普遍关注的主要有Χ2亚麻酸(GLA),二十碳五烯酸(EPA)及二十二碳六烯酸(DHA)[1]。研究表明,GLA、EPA具有降血脂、降血糖、抗血栓、抗炎、抑制血小板凝聚的功能;而DHA则具有健脑、促进大脑发育,防止老年性痴呆及抗心血管疾病的作用。[2]。但由于人类及其它哺乳类动物缺乏△9以上的减饱和酶,故它们在体内不能合成,只能从饮食中摄取。通常,这些·37·2001年28(1)微生物学通报ΞΞΞ现在武汉华中理工大学环境科学与工程系收稿日期:1999211217,修回日期:2000201205武汉市科委基金资助项目(No.996001019G)PUFAs仅存在于某些深海鱼及某些动植物体内,由于受资源的限制,其产量不能满足人们的需求,而研究表明,某些低等海洋真菌具有合成PUFA的能力[3,4],且微生物培养具有发酵周期快,不受条件限制等优点,故成为近年来人们研究的热点。本文从海水中分离了一种产EPA和DHA的真菌,并运用HP26890毛细管气相色谱对其含量进行了测定。1材料与方法1.1水样来源中国南海水样加以芝麻、瓜子、亚麻子、花生、黄豆、核桃仁并于28℃富集60d得到各分离水样。1.2试剂及仪器1.2.1PUFA甲酯标准品:GLA甲酯,EPA甲酯及DHA甲酯购自Sigma公司,标准品以精制苯作溶剂配制标准溶液。注射用硫酸链霉素:华北制药股份有限公司。其它试剂均为分析纯。11212气相色谱仪:惠普HP26890;FID检测器;HP3398AGCChemstation积分仪;HP2IN2NOWAX(CrosslinkedPolyethyleneGlycol)毛细管柱:30m×0.25mm×0.2