柱前衍生-反相高效液相色谱法测定乳及乳制品中的L-羟脯氨酸-蒲云霞

［作者简介］蒲云霞(1974－)，女，硕士，主管检验师，主要从事食品与水质理化检验工作。【化学测定方法】柱前衍生－反相高效液相色谱法测定乳及乳制品中的L－羟脯氨酸蒲云霞，徐晓枫，苏军，李伟，单美娜(内蒙古疾病预防控制中心，呼和浩特010031)［摘要］目的:建立柱前衍生－反相高效液相色潽法测定乳及乳制品中L－羟脯氨酸含量。方法:乳及乳制品中蛋白质经酸水解后，用2，4二硝基氟苯对L－羟脯氨酸进行衍生，采用250mm×4．6mm，5μmDia-monsilAAA分析柱进行分离，检测波长360nm，流动相为0．02mol/L磷酸氢二钠与磷酸二氢盐缓冲液、乙腈、甲醇，流速1．0ml/mim，采用梯度洗脱。结果:L－羟脯氨酸的浓度与峰面积成良好的线性关系，相关系数r为0．9994，回收率在94．0%～97．4%之间，样品的测定结果良好。结论:本方法测定乳及乳制品中L－羟脯氨酸灵敏度较高，干扰因素少，结果稳定、准确，适合乳及乳制品中L－羟脯氨酸的测定。［关键词］高效液相色谱法;柱前衍生;L－羟脯氨酸;乳及乳制品［中图分类号］O657．7+2［文献标识码］A［文章编号］1004－8685(2012)09－2056－03DeterminationofL－HydroxyprolineindairyanddairyproductsbyReversedPhaseHighPerformanceLiquidChromatographywithPrecolumnDerivatizationPUYun－xia，XUXiao－feng，SUJun，LIWei，SHANMei－na(InnerMongoliaCenterforDiseaseControlandPrevention，Huhehot010031，China)［Abstract］Objective:Precolumnderivatization－Reversedphasehighperformanceliquidchromatographymeth-od(RP－HPLC)wasestablishedfordeterminationofL－Hydroxyprolineindairyanddairyproducts．Methods:SampleswerehydrolyzedinHCl．2，4－Dinitrofluorobenzene，aderivatizationreagent，wasusedforsamplederivat-ization．A5μmDiamonsilAAAcolumnwasusedforseparationwithamobilephaseconsistof0．02mol/LNaH2PO4/Na2HPO4－methanol－Acentrile(9∶1)forgradientelution．Thedetectionwavelengthwasat360nm．Results:TheresultsshowedthatconcentrationofL－Hydroxyprolineandpeakareasachievedanicelinearrelation，rwas0．9994．Therecoverywasfrom94．0%to97．4%．Conclusion:Theproposedmethodwasstable，accurate，highsensitive，less－interferenceandsuitablefordeterminationofL－Hydroxyprolineindairyanddairyproducts．［Keywords］ReversedPhaseHighperformanceliquidchromatography;Precolumnderivatization;L－Hydroxyproline;DairyanddairyproductsL－羟脯氨酸(L－Hydroxyproline，L－HYP)是水解动物蛋白中特有的氨基酸，不属于20种常见氨基酸，约占胶原蛋白氨基酸总量的10%。水解动物蛋白(水解明胶)是以动物皮革中的胶原蛋白为原料，进行水解、精制而成的水解产物。由于水解动物的蛋白质含量达85%以上，不法商贩为降低生产成本，将其掺加到乳及乳制品中以提高蛋白质含量。2010年，国家卫生部公布的《食品中可能违法添加的非食用物质名单(第二批)》的通知明确规定乳及乳制品、含乳饮料中不得添加水解动物蛋白作为蛋白质来源。由于乳蛋白质不含L_羟脯氨酸，2011年，国家食品风险监测计划中将L－羟脯氨酸作为乳及乳乳制品质量专项监督检查的项目。L－羟脯氨酸的检测方法主要有分光光度法［1～3］、高效液相色谱法［4，5］、液质联用法［6］、氨基酸分析仪法［7］等。液相色谱柱前衍生试剂一般为2