基因工程2-第二节-重组DNA技术

第二节第二节重组重组DNA技术技术一、重组一、重组DNA技术相关概念技术相关概念（一）（一）DNA克隆克隆克隆（克隆（clone）：）：来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。克隆化（克隆化（cloning）：）：获取同一拷贝的过程，即无性繁殖。获取同一拷贝的过程，即无性繁殖。分子克隆（分子克隆（DNA克隆）克隆）细胞克隆细胞克隆个体克隆（动物或植物）个体克隆（动物或植物）DNA克隆：克隆：应用酶学的方法，在体外将各种来源的应用酶学的方法，在体外将各种来源的DNA与载体与载体DNA结合成具有自我复制能力的结合成具有自我复制能力的DNA分子，继而通过转化或转染宿主细胞，分子，继而通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增、提取获得大量同一扩增、提取获得大量同一DNA分子。又称基分子。又称基因克隆或重组因克隆或重组DNA。基因工程：基因工程：实现基因克隆所采用的方法及相关实现基因克隆所采用的方法及相关的工作，又称为的工作，又称为重组重组DNA技术技术(recom-binantDNAtechnology)。（二）工具酶（二）工具酶限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶DNADNA聚合酶聚合酶I逆转录酶逆转录酶DNADNA连接酶连接酶碱性磷酸酶碱性磷酸酶末端转移酶末端转移酶TaqTaqDNADNA聚合酶聚合酶限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶（restrictionendonuclease）识别识别DNA的特异序列，并在识别位的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。的一类内切酶。是细菌内存在的保护性酶。分为是细菌内存在的保护性酶。分为I、II、III三类。三类。II类酶识别序列特点为类酶识别序列特点为回文结构文结构。······GGATCC············CCTAGG······5'5'3'3'限制性核酸内切酶作用后产生两种末端：限制性核酸内切酶作用后产生两种末端：钝性末端钝性末端(bluntend)(bluntend)粘性末端粘性末端(stickyend)(stickyend)HindIIIBamHIGCCTAGGATCCG+GTCCAGGACCTG+GTCGACCAGCTGGGATCCCCTAGG