一株吡嘧磺隆降解菌的分离鉴定及生物学特性

18柱固相萃取柱净化后,以3种不同比例的丙酮和正己烷混合剂分3步洗脱,氮气吹干,5mL乙腈溶解,过0.22μm有机滤膜,供HPLC测定。(2)高效液相色谱条件:流动相(经过优化后的配比):乙腈/水(用磷酸调节pH值3.0)=70:30(V/V);流速:1mL/min;柱温:30°C;进样量:10μL;检测波长为241nm。(3)菌株S8-1对吡嘧磺隆降解率的测定:吡嘧磺隆降解率的计算公式为:吡嘧磺隆降解率(%)=(CK−CS)/CK×100%。其中CS降解菌处理后的吡嘧磺隆浓度(mg/L);CK为空白培养基中吡嘧磺隆浓度(mg/L)。2结果与讨论2.1菌株的鉴定2.1.1菌落形态及生理生化特征:经过反复富集培养和双层平板夹心法纯化分离,分离获得形态不同的纯化菌株15株。利用吡嘧磺隆除草剂作为唯一碳源进行加压选择,选择单菌落直径大即繁殖速度快、抗性较好的1个菌株作为目标菌株命名为S8-1。S8-1在PSB双层平板(含100mg/L吡嘧磺隆)培养基上,30°C、7500lx光照厌氧培养,7d后形成红色的圆形铁饼状和点状菌落,菌落湿润且正反面颜色一致,边缘整齐光滑且颜色较中间稍浅,有光泽,中间稍稍隆起(图1),菌落直径0.54mm−3.40mm。光学显微镜下观察,革兰氏阴性,单细胞呈小球形或卵状,有时细胞呈珠状串联,能在厌氧或好氧条件下生长。该菌超薄切片电镜观察表明:菌体切片形态多变,以短杆形为主。以二分分裂繁殖,极生鞭毛(图2),菌体大小(0.7−1.2)μm×(0.8−2.5)μm(图3),光合内膜结构为片层状,位于质膜之下并与质膜平行(图4)。菌株的生理生化特征见表1。2.1.2菌株S8-1的培养特征:富集培养时,培养液呈深褐色,培养瓶壁上有深红色的菌体附着物。纯化后菌株在光照厌氧或黑暗好氧及微好氧条件下均能够生长,光照厌氧液体培养液开始变浑浊,随后培养液为淡红黄色,对数生长期之后培养液变为鲜红色或深棕红色,培养时间过长,培养瓶底部可见菌体聚集成絮状沉淀。若培养的温度或光照强度过高,菌体过度代谢而死亡,培养液变黑发臭。尹乐斌等:一株吡嘧磺隆降解菌S8-1的分离鉴定及生物学特性1435http://journals.im.ac.cn/wswxtbcn表1菌株S8-1的生理生化特性Table1BiologicalandphysiologicalcharacteristicsofstrainS8-1CharacteristicsResultsCharacteristicsResultsCharacteristicsResultsGramstain−3%NaCl−Aerobicdarkgrowth+Motility+M.Rreaction−Succinateutilization+Hydrogensulfide+Citrateutilization+Mannitolutilization+V-Preaction−Acidfromcarbohydrates−Glycerolutilization+Gelatinliquefaction+Indoleproduction−Pyruvateutilization+Catalase+Urease−Benzoateutilization−Oxidase+Pigmentproduction+Ammoniautilization+Strachhydrolysis+Nitratereduction+Glucoseutilization+Note:+:Positive;−:Negative.图1S8-1在双层琼脂上的菌落形态(培养7d)Fig.1ThesinglecolonymorphologyofS8-1indouble-agarplate(Culturedfor7d)图2S8-1极生鞭毛电镜照片(×6000)Fig.2ScannerelectronphotographofpolarflagellumofS8-1(×6000)2.1.3菌株S8-1活细胞光谱扫描:菌株S8-1的活细胞经过紫外分光光度计连续扫描,其色素吸收峰如图5所示,在波长379nm、592nm、805nm及