光合细菌的分离培养与应用初探

光合细菌的分离培养与应用初探‘摘要光合细菌在无一氛条件下能分解利用氛、亚峭酸、硫化氮等有害物质,使养疽水休净化,同时能降低水质底质的生化耗氛号,从而间接提高溶解氧;光合细菌还可以门于欲虾经贝及禽言的养痊,对农作物与人体保健的应用亦有广阔的开发前景。关健词光合细菌,分离,培养,应用.光合细菌(P三B)是一种f贻以光作为能源,以C02或有机物作为碳源而进行生长繁殖的微生物.它能利用氨、亚硝峻和琉化氢等有害物质,故在有机质丰富的水体中可大量繁殖,使污水的BOD下降,在净化水质中起到了独特的作用.PSB菌体又是一种含蛋白质(滩%)、脂肪(8%)、大量胡萝卜索、B族维生素和辅酶Q及活性促生长抗病因子的特殊细菌.PSB的作用已引起水产养殖界和环境保护界的重视.PSB亦可作为鱼虾贝类和禽畜的饵(饲)料,对水稻、蔬菜均有增产作用.我们于1993年2月开始对PSB进行分离培养,并在生产上作应用试验,现将初步结果报道如下.1分离与培养1.1材料的采集分离材料采集于宁德市某豆腐作坊灼排水沟,附着于石头上呈橙黄色或乳白色的沉积物。1.2分离培养基的配制KZHpo‘0.69KHZpO;0.59(NH‘):50‘1.09Mgso‘0.29NaC10.29Na:S:0:0.19NaAeo.5~1.09pH6.7酵母膏0.19CaC工20.29蒸馏水lo00m18磅蒸压灭菌20分钟1。3分离方法称取沉积物19,加无菌水5ml充分振荡打散,制成悬浊菌液,然后悬浊菌液与液体培养按1:5比例装入40x18omm的大试管中,在液面上加一层灭菌的液体石蜡形成厌氧,置温度28~30OC,光照强度为800oLox进行厌氧培养,三天后培养液明显呈深红色.尔后,以培养液进行琼脂平扳划线分离、纯化,平扳培养基成份如下NH‘Cl1.09工交。HPO‘0.59MgCI:0.29NaCI2.09酵母膏0.19琼月旨l主一:·09水”01川劫戈份济解后,以1洲旁压力灭菌20分钟,然后无菌操作,加入(1)经过滤灭菌的收稿「J期:飞394年1月1994夕卜第6游第1户l阮少江光合务U菌的分离培养与应用初探3一!NaHCO35.o/6oml水;(2)沁ml经过滤灭菌的乙醇或戊醇或4%丙氨酸,用过滤灭菌的o.INH。PO‘调pH至7.0,趁热进行倒平板,待平板凝固后,在平板表面进行划线,然后在培养基表面用灭菌液体石蜡封面,培养条件同上,三天后出现红色小菌落,六天’后单菌落生长良好,挑取单菌落重复分离,直至得到纯单菌株.笔者共获得两株.1.4菌株特征1‘菌株特征菌体呈短杆状至球形,大小为0.5一1.2x2一2.5卜m,多见其特殊的“Z”形排列的链状,琼脂平板菌落圆形,直径。.3一1mm,表面微凸,呈绛红色,不透明.菌液暴露空气生长时,培养液由暗红色到紫红色.经鉴定为英膜红假单胞菌〔Rhodops“::domonasCapsujata(MolisCh)VanNiel1994〕.2’菌株特征菌体杆状,两端钝圆,偶见稍弯曲,大小为0.6一0.9x1.3一2.8件m,革兰氏}卿比,繁殖时,芽生,可见到呈哑铃状;琼脂平板厌氧光照28~300C培养六天,菌落圆形,边缘整齐,表面凸而状,不透明,呈深红色至暗红色,经鉴定为沼泽红假单胞菌〔R注。loPseudomomasPalustris(MolisCh)VanNiel1994〕.1.5实验室二级培养配制分离培养基分装于500ml锥形瓶,8磅灭菌20分钟,将培养4~6天生长良好的斜面菌种的菌落刮至事先准备好的培养基(或无菌水)的试管中,充分振荡,把菌体打散,然后接到锥形瓶中,使培养荃呈微红色,再加足培养基至满瓶,用塑料薄膜封口,橡皮筋扎紧,使之成无氧状态,培养条件同上.经培养3~4天后,培养液呈暗红色或紫红色,菌体含量可达1.5火10’个/ml.1.6扩大培养(批量生产培养)用暴晒两天不灭菌的自来水配制墙养毖,分装于透明大塑料袋(透光度强),每袋10kg,接入二级菌种,接种量与培养液的体积按1:5的比例,排尽袋中的空气,用橡皮筋扎紧袋口,用钨光灯提供光源,光照强度为100。。Lux,经常摇动培养液,防止沉淀,经三天培养,培养液呈暗红色或紫红色,菌体含量可达1.0xlo7‘2.0xl0了个/。1.可供扩大培养用的培养基有培养基1(NH;):50‘1.09MgSO‘o.ZgN二HCO。5.09KZHPO‘0.59NaCI0.29蛋自陈1.59酵母膏0.19自来水IO00mlpH7.1~7.28磅灭菌20分钟培养基ZM;50、0.5:KHZ尸O;0.魄NaAc2.魄酵母膏1.帷自来水1000mlpH8.058访灭菌20分钟2应用试验今年七月初,笔者在宁德市漳湾镇、七都镇和扛浦县!‘璧乡等地的长毛对虾池中试验.试验选择在小潮水时进行,按skg/亩的光合细菌量均匀拌入泥砂