微生物实验指导

实验实验一微生物培养基的配制和微生物培养基的配制和灭菌培养基是将微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的各种营养基质。它具有微生物正常生活所需的各种养料和适宜的环境条件：(1)适当组分和比例的营养物质；(2)适宜的pH值；(3)合适的渗透压；(4)保持无菌状态。所以培养基是培养微生物所必需的最主要材料。培养基的配制是微生物工作者的主要技术操作之一。一、一、实验实验目的目的与耍求耍求：1．了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。2．了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。3．熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。二、实验原理与材料：实验原理与材料：(一)培养基的种类根据培养基的组成成分，可将培养基分为三类：合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。半合成培养基：由一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成的。从培养基的物理状态来分：液体培养基：不加凝固剂。固体培养基：在液体培养基中加2％左右的凝固剂。半固体培养基：在液体培养基中加入0.2％一0.5％凝固剂。微生物最常用的凝固剂为琼脂(其次为明胶)，又叫洋菜、冻粉。它不是一种营养物质，只能被极少数种类的细菌分解利用。琼脂是从海藻中(主要是石花菜)提取而制成的。是一种多糖类化合物，主要成分是复杂的多糖硫酸酯钙盐，琼脂是一种可逆性胶体，在常规浓度下加热到96℃以上即成溶胶状态，融化的琼脂，当温度下降到42℃以下，又凝固为固体。表3-1琼脂与明胶特性比较比较项目琼脂明胶比较项目琼脂明胶熔点(℃)凝固点(℃)酸碱度灰分(％)氧化钙(％)氯化镁(％)氮(％)9640微酸16.01.15O.77O.402520酸性14.0—15.00.00.018.3微生物可利用性耐热性来源化学本质常用浓度（％)绝大多数微生物不能水解利用强植物多糖1.5—2部分微生物能水解利用弱动物蛋白质5一12（二）实验材料1．药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂；马铃薯，蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KN03，MgS04·7H20、FeSO4·7H20、等。2．高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀菌。3．其它：天平、牛角匙、电炉、1NHCl、1NNaOH、pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、吸管、各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、标签等。三、实验三、实验方法与步骤：方法与步骤：(一)、培养基的配置1．培养基的配制常用方法和步骤：(1)称量：按照培养基配方，正确称取各种原料放于搪瓷杯中。(2)溶化：在搪瓷杯中加入所需水量(根据实验需要加入蒸馏水或自来水)，用玻棒搅匀，加热溶解。(3)调pH值(调pH也可以在加琼脂后再调)，用1NNaOH或1NHCl调pH，用pH试纸对照。(4)加琼脂熔化，在琼脂熔化过程中，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦，待完全熔化后，补足所失水分，一般数量少，时间短不必补水。(5)分装：在漏斗架上分装。根据不同的需要进行分装，一般制斜面的装量为管高的五分之一。特别注意不要使培养基粘污在管(瓶)口上以免浸湿棉塞，引起污染。(6)包扎成捆、挂上标签。培养基分装好后，塞上棉塞，用防水纸包扎成捆，挂上所配培养基名称的标签。(7)灭菌备用。灭菌后如需制成斜面的，应在下磅后取出，摆成斜面，(见图3一1)。培养基经灭菌后，必须放在37℃恒温培养箱中培养24小时，如确无菌生长，方可使用。2．三种培养基的配方及配制（1）.牛肉膏蛋白胨琼脂培养基(用于分离和培养细菌，是一种天然培养基)。配方：牛肉膏3克蛋白胨5克氯化钠3克琼脂20克自来水1000毫升pH7．2～7．4灭菌15磅／英寸2，30分钟。本实验将原配方配成各种浓缩液。各种浓度如下：30％牛肉膏、50％蛋白胨，30％氯化钠。以配制200毫升培养基为例：吸取30％牛肉膏2毫升，50％蛋白胨2毫升，30％氯化钠2毫升，加入有刻度的搪瓷烧杯中，然后用自来水补足到200毫升。用玻捧搅匀，在电炉上稍加热，调pH至7.4，加琼脂4克，加热熔化，用玻棒不断搅拌，至琼脂完全溶解为止，趁热在漏斗架上装试管，(见图3—2)。装带有棉塞的无菌试管，装置五分之一的试管高度共12支，作斜面培养基。用铝壳试管帽的各装10毫升，约试管高度的二分之一以上，用作分离时倒平板用。分装完毕，以12支为一捆，用防水纸包扎成捆，(图3—3)挂上标签，灭菌备用。（2）．马铃薯(或豆芽汁)蔗糖(或葡萄糖)琼脂培养基。(用于分离和培养真菌之用，是一种半合成培养基)。配方：去皮马铃薯(或鲜豆芽)200克蔗糖(或葡萄糖)20克自来水1000毫升琼脂20克pH自然灭菌：(含蔗糖)15磅／英寸230分钟。(含葡萄糖)1