实验二--细菌的染色和细菌细胞构造的观察

实验二细菌的染色和细菌细胞细菌的染色和细菌细胞构造的观察构造的观察细菌的染色和细菌细胞构细菌的染色和细菌细胞构造的观察造的观察•目的要求目的要求•染色剂和染色的原理染色剂和染色的原理•实验材料实验材料•实验程序实验程序•思考题思考题目的要求目的要求•学习微生物涂片学习微生物涂片•掌握细菌的一般染色发和革兰氏染色掌握细菌的一般染色发和革兰氏染色•进一步熟练掌握显微镜油镜的使用技术进一步熟练掌握显微镜油镜的使用技术•观察和识别细菌细胞的特殊构造观察和识别细菌细胞的特殊构造染色剂和染色原理染色剂和染色原理Ⅰ•微生物染色的基本原理，是借助物理和化学因素的作用而进行的。微生物染色的基本原理，是借助物理和化学因素的作用而进行的。物理因素如：细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸附作物理因素如：细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸附作用等。用等。化学因素如：正负离子之间的相互吸引等化学因素如：正负离子之间的相互吸引等•染色剂染色剂染料按其电离后所带电荷的性质可分为以下类型：染料按其电离后所带电荷的性质可分为以下类型：1.酸性染料：酸性染料：如酸性复红、刚果红、伊红、藻红、苯胺黑等。如酸性复红、刚果红、伊红、藻红、苯胺黑等。2.碱性染料：碱性染料：一般有碱性复红、中性红、孔雀绿、番红、结晶一般有碱性复红、中性红、孔雀绿、番红、结晶紫、美兰、甲基紫等，细菌易被碱性染料染色。紫、美兰、甲基紫等，细菌易被碱性染料染色。3.中性（复合）染料：中性（复合）染料：如伊红、美兰等，如伊红、美兰等，Wright染料和染料和Gimsa染料等（常用于细胞核染色）。料等（常用于细胞核染色）。4.单纯染色：单纯染色：这类染料的化学亲和力低，大多是偶氮化合物，这类染料的化学亲和力低，大多是偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶剂中，如苏丹类（不溶于水，但溶于脂肪溶剂中，如苏丹类（Sudanb)的染料。的染料。染色剂和染色原理染色剂和染色原理Ⅱ微生物染色常用染料如下表：微生物染色常用染料如下表：实验材料实验材料•涂片染色用的细菌培养物涂片染色用的细菌培养物１.大肠杆菌（大肠杆菌（Escherichiacoli)24h的斜面培养物。的斜面培养物。２.枯草杆菌（枯草杆菌（Bacillussubtilis)12—16h的斜面培养物。的斜面培养物。•载玻片、接种环、镊子、酒精灯、各种染色液、火柴、载玻片、接种环、镊子、酒精灯、各种染色液、火柴、无菌牙签、玻璃铅笔、蒸馏水。无菌牙签、玻璃铅笔、蒸馏水。•显微镜、镜头油、擦镜纸、吸水纸、二甲苯等。显微镜、镜头油、擦镜纸、吸水纸、二甲苯等。•示范片示范片１.苏云金芽孢杆菌（苏云金芽孢杆菌（Bacillusthuringiensis）的芽孢；的芽孢；２.胶质芽孢杆菌（胶质芽孢杆菌（Bacillusmucillaginosus）的荚膜；的荚膜；３.枯草芽孢杆菌的鞭毛。枯草芽孢杆菌的鞭毛。实验程序实验程序Ⅰ（细菌染色的方法和步骤）（细菌染色的方法和步骤）•细菌染色的方法细菌染色的方法:•１.单染色法：单染色法：用一种染色液染菌体后，就可以观察用一种染色液染菌体后，就可以观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。别微生物以及它的特殊构造等。２.复染色法：复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。常有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。常用的有：革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、用的有：革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法、细胞染色法等。芽孢染色法、鞭毛染色法、细胞染色法等。•染色技术的一般过程染色技术的一般过程涂片干燥干燥固定固定染色染色媒染媒染脱色脱色复染复染水洗水洗干燥干燥镜检镜检