环境微生物学实验指导书

环境工程微生物学实验指导书环境工程微生物学实验指导书使用专业：环境科学与环境工程使用院系：贵州大学资源与环境工程学院编制时间：2008年8月目录目录1.显微镜的使用技术及细菌个体形态观察„„„„„„„„„„„„„„„„„„11.1普通光学显微镜的使用„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1.2细菌的形态观察2.细菌的染色和细胞构造的观察2.1简单染色法2.2革兰氏染色法2.3芽孢染色法3.放线菌和真菌的形态观察3.1放线菌的形态观察3.2真菌的形态观察4.微生物细胞大小和数量的测定4.1微生物细胞大小的测定4.2微生物细胞数量的测定5.微生物培养基的配制和灭菌5.1微生物培养基的配制5.2微生物的灭菌第一章显微镜的使用技术及细菌个体形态观察17世纪荷兰人列文虎克制造了第一台显微镜，首次把微生物世界展现在人类面前，至今已经历300余年。显微镜的问世对微生物学的奠基和发展起到了不可估量的作用。随着科学技术的发展，显微镜的种类越来越多，用途也越来越广泛。微生物学实验中最常用的是普通光学显微镜，下面将作详细介绍。第一节普通光学显微镜的使用普通光学显微镜简称光学显微镜（lightmicroscope），以平均波长为550nm的可见光作为光源，能分辨的两点距离约为0.22μm。多数细菌的个体大于0.25μm，因此可在光学显微镜下观察。由于许多细菌的大小与光学显微镜的分辨率处于同个数量级，为了看清细菌的形态与结构，经常使用油镜来提高显微镜的分辨率。在光学显微镜的使用中，油镜的使用是一项十分重要的操作技术。一、实验目的、要求1、了解普通光学显微镜的基本构造和工作原理。2、学习并掌握普通光学显微镜，重点是油镜的使用技术和维护知识。3、在油镜下观察细菌的几种基本形态。4、采用悬滴法在高倍镜下观察细菌运动。二、基本原理（一）普通光学显微镜的构造普通光学显微镜由机械系统和光学系统两部分组成（图1-1）。1、机械系统机械系统包括镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调节器等。（1）镜座：它是显微镜的基座，可使显微镜平稳地放置在平台上。（2）镜臂：用以支持镜筒，也是移动显微镜时手握的部位。（3）镜筒：它是连接接目镜（简称目镜）和接物镜（简称物镜）的金属圆筒。镜筒上端插入目镜，下端与物镜转换器相接。镜筒长度一般固定，通常是160mm。有些显微镜的镜筒长度可以调节。（4）物镜转换器：它是一个用于安装物镜的圆盘，位于镜筒下端，其上装有3～5个不同放大倍数的物镜。为了使用方便，物镜一般按由低倍到高倍的顺序安装。转动物镜转换器可以选用合适的物镜。转换物镜时，必须用手旋转圆盘，切勿用手推动物镜，以免松脱物镜而招致损坏。（5）载物台：载物台又称镜台，是放置标本的地方，呈方形或圆形。载物台上装有压片夹，可以固定被检标本；有标本移动器，转动螺旋可以使标本前后和左右移动。有些标本移动器上刻有标尺，可指示标本的位置，便于重复观察。（6）调节器：调节器又称调焦装置，由粗调螺旋和细调螺旋组成，用于调节物镜与标本间的距离，使物像更清晰。粗调螺旋转动一圈可使镜筒升降约10mm，细调螺旋转动一圈可使镜筒升降约0.1mm。图1-1普通光学显微镜的构造1.镜座2.镜臂3.镜筒4.转换器5.载物台6.压片夹7.标本移动器8.粗调螺旋9.细调螺旋10.目镜11.物镜12.虹彩光阑（光圈）13.聚光器14.反光镜2、光学系统光学系统包括目镜、物镜、聚光器、反光镜等。（1）目镜：它的功能是把物镜放大的物像再次放大。目镜一般由两块透镜组成。上面一块称接目透镜，下面一块称场镜。在两块透镜之间或在场镜下方有一光阑。由于光阑的大小决定着视野的大小，故它又称为视野光阑。标本成像于光阑限定的范围之内，在光阑上粘一小段细发可用作指针，指示视野中标本的位置。在进行显微测量时，目镜测微尺被安装在视野光阑上。目镜上刻有5×、10×、15×、20×等放大倍数。可按需选用。（2）物镜：它的功能是把标本放大，产生物像。物镜可分为低倍镜（4或10×）、中倍镜（20×）、高倍镜（40～60×）和油镜（100×）。一般油镜上刻有“OI”（oilimmersion）或HI（homogeneousimmersion）字样，有时刻有一圈红线或黑线，以示区别。物镜上通常标有放大倍数、数值孔径（numericalaperture，简写为NA）、工作距离（物镜下端至盖玻片间的距离，mm）及盖玻片厚度等参数（图1-2）。以油镜为例，100/1.25分别表示放大倍数为100倍，NA为1.25；160/0.17分别表示镜筒长度160mm，盖玻片厚度等于或小于0.17mm。图1-2XSP-I6型显微镜物镜的主要参数（3）聚光器：聚光器又称聚光镜，它的功能是把平行的光线聚焦于标本上，增强照明度。聚光器安装在镜台下，可上下移动。使用低倍物镜（简