氧化亚铁硫杆菌的菌落分离研究-张在海

氧化亚铁硫杆菌的菌落分离研究*张在海,邱冠周,胡岳华,柳建设(中南工业大学矿物工程系,湖南长沙410083)摘要:以琼脂为凝固剂,研究了亚铁含量、磷酸盐含量、pH值、添加硫氰酸钾对氧化亚铁硫杆菌菌落产生的影响和细菌的再培养。结果表明培养基能否有效供给酸耗用酸,使凝固剂不被酸降解(胨化),使细菌能够稳定固着生长、繁殖是菌落产生的关键条件。控制好这些条件,可以使菌落数量比9K固体培养基提高近两个数量级。关键词:氧化亚铁硫杆菌;琼脂;固体培养基;菌落中图分类号:TD925.5文献标识码:A文章编号:1000-6532(2001)01-0019-05氧化亚铁硫杆菌Thiobacillusferrooxi-dansTemple&Colmer(简称T.f菌)是大多浸出场所的主要菌种,对细菌浸出起主要作用。工业浸矿用的T.f菌多为经富集培养后的混和菌种,而且由于T.f菌、氧化亚铁铁杆菌FerrobacillusferrooxidansLeathen&Braley(简称F.f菌)、氧化硫硫杆菌ThiobacillusthiooxidansWaksman&Joffe(T.t菌)在外形上和生理生化习性上极为相似,因而一般习惯不加区分地称为T.f菌[1]。这样就很难区分各种菌种在浸矿中所起的作用,并使细菌浸矿机理的探讨变得复杂。分离出细菌纯种或纯株进行细菌学特性和浸矿比较研究就可使复杂的机理研究简单化。固体培养基分离是细菌分离的一种常用手段,它是利用细菌先分离、后克隆的原则,形成一个个肉眼可见的单菌落进行分离的。利用固体培养基可进行细菌分离、鉴定、计数、生理生化和遗传、育种筛选等研究工作,它是一切微生物研究工作的必要手段。TheInfluenceofExtractiononFreeRadicalinCoalLIUGuo-gen,QIUGuan-zhou,HUANGCha-xiang(CentralSouthUniversity,Changsha,Hunan,China)Abstract:Inthispaper,theESR(electronspinresonance)spectraofcoalanditsproductofextractionhavebeensystematicallystudiedbymeansofJES-FE1xGmodelESRspectrome-ter.Also,thespectracanbeeasilyobtainedatroomtemperature.Resultsobtainedshowedthatagreatnumberofstablefreeradicalswerecontainedincoalanditsproductofextrac-tion.Theextractionresultsinobviousincreaseoffreeradicalconcentration,andthereasonhasbeendiscussed.Keywords:Extraction;Coal;Freeradical;Electronspinresonance*基金项目:国家杰出青年科学基金资助(59925412)收稿日期:2000-03-18作者简介:张在海(1970-),男,中南工业大学矿物工程系在读博士研究生,从事矿冶微生物的开发和改良工作第1期2001年2月矿产综合利用MultipurposeUtilizationofMineralResourcesNo.1Feb.2001琼脂是固体培养基普遍使用的凝固剂,以琼脂为凝固剂,既经济又易操作,便于一般实验室进行研究。但对于T.f菌,资料[2,3]认为由于T.f菌生长于酸性环境,而琼脂在这一条件下易于水解,可能释放出对自养的T.f菌有强烈抑制作用的葡萄糖(但有实验[4]未检测到可测量的浓度);而且琼脂中含有的过多的磷酸盐杂质也会抑制T.f菌的生长,因而当9K液体培养的菌液稀释两个数量级(约105个菌/mL)时,再接种到9K固体培养基中一般没有菌落产生。在遗传育种时,致使大部分菌株不能被筛选。用无机硅胶作凝固剂,硅胶操作性能极差,难于涂平板。目前使用最多的是以琼脂糖为凝固剂[5],如Harri-son的MS-Fe2+培养基、Johnson的FeTSB和FeSB0培养基。这种凝固剂效果最好,但是琼脂糖价格昂贵。本实验以琼脂为凝固剂,研究抑制菌落产生的原因和制作培养基的最好条件。1材料和方法1.1材料菌种:取自广东大宝山铜矿,经9K培养基富集培养的T.f混和菌株。琼脂:为福建惠安化工厂生产。1.2方法1.2.1培养基分为三部分制作。A:基本盐液(成分变化见结果部分)250mL+琼脂15g,pH7.0;B:基本盐液750mL(pH变化见结果部分);C:无菌的硫酸亚铁晶体。硫酸亚铁为经微孔