PRV、PCV2与PPV三重PCR检测方法的建立与初步应用

·8·AnimalHusbandry&VeterinaryMedicine2015V01．47No．1255192M．2000DNAMarker；1．100倍；2．101倍；3．102倍；4．103倍；5．104倍；6．105倍图5PRV、PCV2、PPV三PCR敏感性结果bp759255192、I2000【)、、m『k∽：I0怖J小样4-图6部分临床样本检测结果3讨论在建立多重PCR方法时，引物的设计是先决条件，PCR反应中各项因素均可影响该方法的建立是否成功，研究发现退火温度的选择有较大影响力，试验表明该三重PCR的最佳退火温度为55℃或56qC。在敏感性试验中，通过将三重PCR与单一PCR的敏感性比较发现，三重PCR中3种病毒的敏感性均相对降低，约下降了1个稀释倍数，对于PCR反应体系中加人多对引物对其敏感性是否产生影响还需进一步研究。近年来，猪病毒性疾病已严重危害世界规模化养猪业。PRV、PCV2和PPV不仅是猪呼吸道疾病的重要病原，同时也是猪繁殖障碍性疾病的主要病因，引起的猪繁殖障碍主要表现为妊娠母猪发生流产，产死胎、木乃伊胎、无活力弱仔、畸形胎，少仔和不育，发病原因比较复杂，危害严重；引起猪呼吸道疾病时主要以发热、咳嗽、气喘、呼吸困难、眼鼻分泌物增多、食欲减退、迅速消瘦等为特征。我国许多规模化猪场均不同程度受到猪呼吸道疾病及猪繁殖障碍性疾病的威胁，疾病的发生和流行日益严重，发病率越来越高‘6。71。目前猪群发生疾病时多种病原混合感染和继发感染的情况越来越普遍，杨增岐等1试验表明PCV2与PRV混合感染率为21．7％；张明林等归。试验结果表明PRRSV与PPV双重感染率达16．31％；王波等¨刚试验结果显示陕西省部分地区送检病料中普遍存在PRRSV与CSFV、PCV2、PRV的二重、三重甚至四重混合感染。利用本试验建立的PRV、PCV2和PPV三重PCR检测方法对来自贵州省的56份临床样品进行了初步应用，检测发现这3种病毒中二重感染率为12．5％，三重感染率为3．6％，进一步证实了该3种病毒混合感染的存在。因此快速、准确地诊断出发病原因对于及时并有针对性地对发病猪场采取药物治疗或免疫预防措施，对降低养猪生产中的疾病风险具有重要的现实意义。本试验建立的3种DNA病毒的三重PCR检测方法，实现了3种病毒的同步检测，能快速、准确地对临床病料进检测，是一种实用、快速的检测方法，具有广阔的应用前景。参考文献：陈微晶．cDNA芯片技术检测猪呼吸道疾病综合征相关病毒方法的建立[D]．黑龙江：黑龙江八一农垦大学，2008．刘志杰，曾智勇，汤德元，等．猪繁殖障碍病毒性疫病六重PCR检测方法的建立及应用[J]．畜牧兽医学报，2012，43(9)：1429-1436．LailaDarwicha，EnricMateua．Immunologyofporcinecircovirustype2(PCV2)[J]．VirusResearch，2012(164)：6l-67．陶生策，张治平，张先恩．PCR技术研究进展[J]．生物工程进展，2001，21(4)：26-29．王稳，屈武斌，申志勇，等．利用MPprimer设计引物并优化扩增条件以提高多重PCR效率的试验研究[J]．生物化学与生物物理进展，2010，37(3)：342—346．李春燕，王洪光，汤德元，等．规模化猪场常见猪繁殖障碍病毒性疫病混合感染及其防制研究[J]．猪业科学，2013(10)：89—91．刘翠权．广西395个规模猪场猪呼吸道疾病综合征的病原学调查及防控措施[D]．南京：南京农业大学，2011．杨增岐，杨泽晓，姜艳芬，等．陕西省PCV2感染的血清学调查[J]．西北农林科技大学学报，2006，34(4)：1—4．张明林，谢琴．宁夏猪场猪蓝耳病和细小病毒病的流行病学和血清学调查[J]．甘肃畜牧兽医，2010，40(1)：4-6．王波，张鹏，杨增岐，等．陕西省PRRSV与CSFV、PCV2、PRV混合感染的检测[J]．河北农业学报，2009，18(5)：27—30．吣咖啪珊姗瑚姗郇㈣裟姗瑚㈣]]j]l0l二J心口_!J瞪№口隅p_二l万方数据PRV、PCV2与PPV三重PCR检测方法的建立与初步应用PRV、PCV2与PPV三重PCR检测方法的建立与初步应用作者：王洪光，李绍洪，汤德元，曾智勇，李春燕，郝飞，刘建，李达，韦冠东作者单位：王洪光,汤德元,曾智勇,李春燕,郝飞,刘建,李达,韦冠东(贵州大学动物科学学院,贵州贵阳,550025)，李绍洪(贵州省思南县凉水井镇农业服务中心,贵州思南,565101)刊名：畜牧与兽医英文刊名：AnimalHusbandry&VeterinaryMedicine年，卷(期)：2015,47(1)引用本文格式：王洪光.李绍洪.汤德元.曾智勇.李春燕.郝