淡水样提取DNA方法
- 海之魂
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2020-03-31 14:15:41
文档简介:
水样:水样:1.取样品1L,于50ml离心管,4℃13000g离心10min,弃上清,重复收集以富集菌体。2.加裂解液5ml,斡旋振荡器震荡3min以混匀;3.液氮–65℃水浴循环冻融3次,每次2min;4.加入纤维素酶、蜗牛酶、溶菌酶(终浓度分别为6mg/ml、3mg/ml、1mg/ml),37℃水浴90min,每15min轻轻颠倒混匀一次;5.加入0.5ml20%SDS和50ul30mg/mL蛋白酶K,55℃水浴30min,每隔10min轻轻颠倒混匀;6.4℃6000g离心10min,收集上清,转移到无菌2ml离心管;7.加入等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),轻柔混匀,4℃14000g离心10min,转移上层水相到2ml无菌离心管中;8.加入等体积氯仿:异戊醇(24:1),轻柔混匀,4℃12000g离心15min,转移上层水相到1.5ml无菌离心管中;9.加入0.6倍体积的异丙醇(或1倍体积的20%PEG6000–2.5MNaCl)室温沉淀90min,4℃16000g离心15min,弃上清;10.沉淀用冰预冷的70%乙醇洗涤一次,离心、风干,重悬于适量ul无菌水中。11.电泳检测DNA,并测定其浓度。
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