持久性有机污染物的荧光免疫分析

学校代号：10532学密号：S11111050级：湖南大学硕士学位论文持久性有机污染物的荧光免疫分析AnalysisofPersistentOrganicPollutantsbyFluorescenceImmunoassayⅥ馅NGXinB．S．(XinyangNormalUniversity)2011AthesissubmittedinpartialsatisfactionoftheRequirementsforthedegreeofMasterofScience1nAnalyticalChemistryintheGraduateSchoolofHunanUniversitySupervisorProfessorCaiQingyunMay，2014㈨3㈣8㈣5吣5㈣0吣6㈣2㈣Y湖南大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。正净．作者签名：王蒸互日期：加／悻6月弓日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权湖南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于1、保密口，在——年解密后适用本授权书。2、不保密4(请在以上相应方框内打“√”)作者签名：王应刷磁轹秀院日期：2,ol争年舌月弓日日期：孙，y年／月；日硕士学位论文摘要持久性有机污染物(PersistentOrganicPollutants，简称POPs)是持续存在于环境中，可以通过生物食物链进行积累，对人类的健康和生存造成严重危害的化学物质。随着科学技术和现代工业技术的快速发展，释放到环境中的POPs越来越多，使其成为一个备受人们广泛关注的全球性的环境问题。怎样快速、灵敏、准确的检测出化妆品、日用品、食品以及环境中存在的少量POPs，己成为了分析化学以及环境监测中对POPs分析的一个新的挑战。POPs的监测工作目前主要基于色谱、色谱．质谱联用技术等大型仪器分析检测方法，但繁重复杂的样品前处理(包括纯化、浓缩或衍生化等)，昂贵的仪器以及实验环境要求苛刻等缺点使这些方法不利于大批量样品的实时分析测定。所以，发展针对POPs的快速检测技术有着非常重要的意义。本文在间接竞争酶联免疫吸附检测的基础上用荧光分析法，建立了对八氯苯乙烯(OCS)和三(2，3一二溴丙基)异三聚氰酸酯(TBC)等POPs的快速分析方法，为POPs的检测分析提供了新的思路。具体的研究工作内容如下：(1)酶标型荧光免疫测定TBC：利用本实验室首次以兔子免疫制备的TBC抗体，基于竞争型的免疫分析模式，以Ce3+为探针，辣根过氧化氢酶(HRP)为标记构造了测定TBC的荧光免疫分析体系。Ce4+没有荧光而Ce3+具有比较强的荧光，HRP氧化过氧化氢(H20z)可产生羟基自由基，羟基自由基进而可将Ce3+氧化成为Ce4+，使得体系的荧光强度发生明显猝灭。通过TBC参与的竞争反应控制连接到酶标板上的HRP的量与羟基自由基的量，建立起Ce3+溶液的荧光强度与TBC的浓度的关系，实现目标物TBC的定量检测。该方法检测限为6．2nM，选择性好，有较高的灵敏度和准确度，重复性好，对实际样品回收率的测定结果令人满意。(2)利用荧光共振能量转移构建罗丹明B标记的荧光免疫传感器用于OCS检测：利用本实验室制备的OCS抗体，基于竞争性免疫反应，设计了OCS的选择性的荧光免疫分析方法。CdTe量子点的发射峰在530nm，罗丹明B的吸收峰是530nm；在PBS中，巯基乙酸包裹的CdTe量子点表面带负电荷，罗丹明B标记OCS后表面带正电荷，通过静电引力吸附至两者距离小于10nm后，两者可构成荧光共振能量转移的供／受体对。OCS抗体吸附至酶标板后，当测试液中存在OCS时，由于竞争结合抗体，使得溶液中剩下更多的罗丹明B标记的OCS。向溶液中加入CdTe量子点充分混合后，罗丹明B的峰强强度与量子点峰强强度的比值增大，基于此测定OCS的浓度。此分析方法检测限达到3．8nM，与传统的质II持久性有机污染物的荧光免疫分析谱、色谱相比较，有费用低，简单方便等优势，还有较高的灵敏度、精确度与优异的选择性，在实际样品检测中有着良好的应用前景。关键词：荧光免疫传感器；间接竞争酶联免疫吸附检测法；荧光共振能量转移；辣根过氧化氢酶；三(2，3一二溴丙基)异三聚氰酸酯l八氯苯乙烯硕士学位论文AbstractPer