利用亨盖特厌氧滚管技术检测双歧杆菌制品中的活菌数

7T5利用亨盖特厌氧滚管技术检测双歧杆菌制品中的活菌数李平兰张篪中国农业走学食品学院微生物组100094摘要介绍了亨盖特厌氧滚管技术及其检测双歧杆菌制品中活菌数的具体方法。关键词三重量墨堇查双歧杆菌．塑堕堂鼍夏誊彳稳带AbstractThispaperintroducestechniqueforHungateanaerobiccultiv|tio~a确aconcreterolltubemethoddetectingCFUinbifidobacteriaproductsKeyWordsTechniqueforHungateanaerobiccultivitionBifidobacteriaCFUDetection亨盖特(Hungate)厌氧滚管技术⋯是美国微生物学家亨盖特于1950年首先提出并应用于瘤胃厌氧微生物研究的一种厌氧培养技术。以后这项技术又经历了几十年的不断改进，从而使亨盖特厌氧技术日趋完善．并逐渐发展成为研究厌氧微生物的一套完整技术而且多年来的实践已经证明它是研究严格、专性厌氧菌的一种极为有效的技术。双歧杆菌是人体内的一种生理性细菌，定植于肠道内．属于优势菌群，占婴儿消化道菌丛的92％该菌与人体终生相伴，其数量的多少与人体健康密切相关，是目前公认的一类对机体健康有促进作用的代表性有益菌。如可以在肠粘膜表面形成一个生理屏障．从而抵御伤寒杆菌、致泻性大肠杆菌，痢疾致贺氏杆菌等病原菌的侵袭，保持机体肠道内正常的微生态平衡】信E激活巨吞噬细胞的活性，增强机体细胞的免疫力⋯：能合成B，、B，、B、B烟酸和叶酸等多种维生素；能控制内毒素血症和防治便秘l41．能预防贫血和佝偻病：可以降低亚硝胺等致癌物前体的形成，有防癌和抗癌的作用【s{能拮抗自由基、羟自由基及过氧化脂质，还具有抗衰老的功能_5然而，在人的一生中．双歧杆菌的数回199g2重品学量呈现逐渐下降的趋势：尤其是在老年人的肠道内，其含量更少故为了增加人体内的这种有益菌市场上出现了许多活菌的双歧杆菌制剂(三株口服液、丽珠肠乐、金双歧、斐菲康、威特、生命源口服液、双歧于宝、五株王功能液、双歧王)等双歧杆菌食品(双歧杆菌酸奶、双歧杆菌饮料。)但由于双歧杆菌是一类专性厌氧菌，对氧非常敏感，在有氧的条件下不能生长和易死亡，因而不能像需氧菌或兼性厌氧菌那样生长于通常的琼脂平皿和斜面试管上，这就给双歧杆菌的分离、培养以及实际生产带来较大的困难．也导致了目前市售的多数双歧杆菌产品活菌数不高，达不到规定的质量要求和应有的保健效果。因此，选择一种既简便又准确的检测双歧杆菌制品中活菌数的计数方法无疑是非常必要的。笔者实验室多年来一直从事乳酸菌、双歧杆菌的基础研究和开发应用研究，认为亨盖特厌氧滚管技术是一种适合双歧杆菌活菌计数的极为有效的厌氧培养方法亨盖特厌氧滚管技术主要包括气体除氧系统、预还原培养基的制备以及滚管培养法等一系列厌氧操作技术。下面就如何利用亨盖特厌氧滚管技术进维普资讯http://www.cqvip.comFOODSCIENCE◎分析检验行双歧杆菌活菌计数作一具体的介绍。1铜柱除氧系统铜柱是由一个内部装有铜丝或铜屑的硬质玻璃管构成，此管的大小为40×400mm两端被加工成漏斗状外壁绕有加热带．并与变压器相连来控制电压和稳定铜柱的温度铜柱两端连接胶管，一端连接气钢瓶，一端连接出气管口由于从气钢瓶出来的气体如N，、CO，和H等通常都含有微量O，故当这些气体通过温度约360℃的铜柱时，铜和气体中的微量O化合生成CuO，铜柱则由明亮的黄色变为黑色。当向氧化状的铜柱通入氢气时，氢与氧化铜中的氧就结合形成HO，而CuO又被还原成了铜铜柱则又呈现明亮的黄色。此铜柱可以反复使用、并不断起到除氧的目的当然H源也可以由氢气发生器产生。2预还原培养基及稀释液(098％的生理盐水)的制备制作预还原培养基及稀释液时，先将配制好的培养基和稀释液煮沸驱氧，而后用半定量加样器趁热分装到螺口厌氧试管中．一般琼脂培养基装4．5ml，稀释液装9ml。并插入通N气的长针头以排除O。此时可以清楚地看见培养基内加入的氧化还原电位指示剂刃天青由蓝到红最后变成无色，说明试管内已成为无氧状态．然后盖上螺口的丁烯胶塞及螺盖，灭菌备用。3双歧杆菌样品不同浓度稀释液的制备在无菌条件下准确称取lg固体样品或用无菌注射器吸取lml混合均匀的液体样品，而后加入装有预还原生理盐水的厌氧试管中，振荡器将其振荡均匀．制成l0。。稀释液用无菌注射器吸取1mll0稀释液至另一支装有9ml生理盐水的试管中，制成l0稀释液。按此操作方法依次进行1O倍系列稀释至l0’。，制成不同浓度的样品稀释液备用通常选lO、10～、10、l04个稀释度进行滚管计数4厌氧滚管培养法将盛有溶化的无菌无氧琼脂培养基试管放置于5OC左右的恒温水浴中，用lml无菌注射器分别吸取l0