厌氧污泥胞外多聚物的提取、测定法选择

f一e15卷4期环境科学·23·厌氧污泥胞外多聚物的提取、测定法选择．华系100084)禹’l7乡(清华大学境工程系，北京／／4H~t．1lt6种方法，对4种不同性枕的厌氧污泥的胞外多聚物(EcP)盎行提取试验。此外，采用2种方法测定提取液中多糖浓度，还测定核酸裱度橙蓝细胞的破坏程度通过对比，认为硫髓齿提取的ECP鞍完生t对细胞的破条件下分泌于细胞体外的一些高分子有机物。由于在菌体外所处的特殊位置及其特定的化学组成，使ECP成为影响细菌表面特性的重要因素。ECP的研究最早应用于好氧活性污泥中。到目前为止，研究厌氧污泥的ECP的报道较少，当ECP促成厌氧颗粒污泥形成的假设提出后，这方面的研究才逐渐增多。钉红染色[”]、热沉淀[等方法被甩于提取厌氧擂泥的ECP，但这些方法对各种因素的影响非常敏感，特别是当厌氧污泥含有较多杂质时，数据的重复性更差。为了确切研究选用6种提取和2种测定ECP的方法，进行对比试验，试图找出一种能有效地提取及测定厌氧污泥ECP的方法。1试验方法和材料1．1试验方案一种有效的提取方法应能较完全地提取出ECP，并对细菌细胞的破坏较小，以防止胞内物质增加ECP的测定值，按表1方案试验。1．2污泥样品衰l试验方案I生产性u^韶2生产性UASB3小试UASB中试UASB絮状絮状和颗粒囊粒囊粒啤蔼废球啤酒废球生栝污水啤酒废水l~00-300015D口一3000l560D15D300022—3422—342D24—26选择4种厌氧污泥提取、测定ECP(表2)，它们的性状、颗粒化程度、基质类型、基质浓度和温度都不尽相同，具有较广泛的代表性。1．3污泥样品的预处理取摇匀后枵泥样品约2Oral于离心管中，用3000rlmin转速离心5min，弃去上清液；加入约／0ml0．9生理盐水按上述方法洗涤i重新加入约20ml生理盐水，摇匀后用玻璃匀浆器匀浆，使枵泥颗粒破碎。匀浆后污泥，用移液管移取1．，00ml于10．0ml具塞玻璃试管中用于提取ECP；另取10．00mI于蒸发皿中，用重量法测vSs值。1．‘胞外多聚物的提取I993年6月l9日收到修改稿一攀一维普资讯http://www.cqvip.com·24·环境科学(1)蒸馏水提取法往已加入污泥的玻璃试管中加入9．00ml蒸馏永，摇匀后置于摇床上、●振荡3h，提取液于驹OOr~／miti，离心Stain取上清液待测。(2)硫酸提取法加入8硫酸溶液l5卷4期浓度(mg，gVSs)=×稀释倍数其中，ABS(260)为2fi0nm波长下的吸光度值。2试验结果4000r／min离心5min，取上液待测。测定结果列于表，表3中诳度值和相对标(3)EDTA提取法加入2EDTA二钠准偏差分别为6次平行试验的平均值和相对标盐9．00ml，摇匀后置于4℃冰箱中冷藏，每隔准偏差。20min取出摇匀，3h后4000r／min离心5min，取比较2种多糖的测定方法，可以看出苯酚一上清液待测。·硫酸法溯得的数值相对标准偏差l此较小，而蒽酮(4)潍苯提取法加苯到f0mI左右，振一硫酸法比较大，特别是勰状污泥(泥样l、相荡，在沸水浴中将苯蒸干，后加入沸水到10．Oml对标准偏差大都在l5，以上说明前一种方法刻度，15min后于4000r／mtn离心5mtn，取上清比后者数据的重复性更好。当样品中多糖浓度低液待测。时，苯酚一硫酸法_删得的值要高一些，这是合理(5)氢氧化钠提取法：。加№0H溶的，因为苯酚一硫酸试剂可与游离的寡糖、多糖中液9．O0mI，置于摇床上振荡lh，4O0Of，in离心的己糖、戊糖、糖醛酸(或甲苯衍生物)起显色反5rain，取上清液待剥。．应；荷蒽酮’硫酸试剂对各种己糖、6一脱氧核糖显(6)蒸煮法加蒸馏水9．00m1，置于0．8色深，对戊糖、氪基己糖、糖醛酸等显色弱：。MPa、温度12O℃湿式高压灭菌釜中处理lh，趁ECP的成分比较复杂，不仅有己糖，还舍有戊糖，热于4000r／min离心5min，取上清藏待铡。‘糖醛酸等，所以蒽酹一硫酸法测得的值偏低。但以上各种方法除沸苯法在苯蒸干时试管幂是样品中多糖浓度高时，情况正好相反。这时由加塞外，提取时由应加塞。～～，一于细胞过多破碎，臌内大量的蛋白质、棱酸进入I．5ECP中多糖和核酸的测定·样品液，而幕中的色氨酸等氨基酸会对蒽酮硫(])ECP中多糖的测定选用苯酚一硫酸法：酸试剂的显色反应产生定干扰·从而使测和蒽酮一硫酸法]。以分析纯葡萄糖为标准样得的多糖值偏高25一60。因此，选择苯酚品，制作标准曲线。取上清液1．00ml按操作步骤硫酸法来测定样品液的多糖有更多的优点。处理后，在岛津UV一250光吸收测矗仅土于4种伲样的6种提取_方法测得多糖的浓度480nm(苯'酚城酸法)或625nm(~一硫酸法)测厩序为：NaOH提取法>蒸煮法>沸苯法>吸光度，