HRP标记探针MVR分型法在法医学上的应用

n研压／·I4·!f|]HRP标记探针MVR分型法在法医学上的应用郑秀莽叶健饵锦堂李伯龄(公安部物证鉴定中，北京1ooo38))——一＼／／f?1摘要采用辣根酶标记寡核苷酸棵计数字蝙码小卫星~ls．q-变重复序列(HRP标记探针MvR方法)．检验微量生物材料。结果表明．相当于50,1血液的血痕，单根有毛囊的毛发以厦相当于4p．1唾液的斑迹均获得T清晰易读的MVR图谱，灵敏度迭lng。特此方法应用于检案实践取得了较好的效果。MVR—PCR技术在法医学个人识别和亲子鉴定方面极有应用前景。关键词MvR—PCR辣根酶数字骗码DNA分型个人认定小卫星MS32可变重复序列在中国汉族人群中具有高度多态性，辣根酶标记寡核苷酸探针数字编码小卫星MS可变重复序列方法(HRP标记探~t'MVR方法)对中国汉人分析表明．它在法医学个体识别及亲子鉴定巾有着重要价值lIl。本文作者就该法的法医学戍用有关问题进行了研究，井用实际案件的检验，证实该法可为侦查破案时认定犯罪分子提供直接证据，发挥重要作用。1材料与方法1．1实验材料血液(痕)、毛发、唾液(斑)样品由北京地白愿者提供。并种引物及探针由本实验室合成1．2方法1．2．1DNA提取1．2．1．1常规检材DNA提取：根据辛伯龄等人方法Il进行1．2．1．2微量检材DNA提取：(1)血液(痕)、唾液(斑)：取50,115液(痕)或40,1唾液(斑)，分别加入1ml灭菌水，4℃浸泡30min，10000g离心2min．弃上清，再用火菌水洗涤两次，然后加入5％Chclcx·1002000,1，加蛋自酶K使终浓度为l00~tg／ml，混匀，丁：56℃水浴保温30min，振荡溉匀，沸水煮沸8min，剧烈振荡7s，10000g离一1~,3min，上清液~_Microcon100纯化浓缩后取10ral用扩增。(2)毛发：剪取1根带毛根的毛发(3mm)．放A．05mlEppcndorf管巾，用蒸馏水冲洗两次，然后加入5％Chelex-100200p1，加蛋白酶K至终浓度为1000,g／ml，56℃水浴保温6～8h或过夜，振荡混匀，沸水煮8min，剧烈振荡7s，l0000g离1~,3min，取上消液200,1用于扩增1．2．2辣根酶标记寡核酸探针数编码小卫旱MS可变重复序列方法(HaP标记探针MVR方法)：按郁秀芬等人方法。进行。2结果2．1血痕、单根毛发、唾液DNAMVR图谱分析在法医物证鉴定巾‘血痕、毛发、唾液斑足比较常见的场物证，而且经帮足最少条件荠．能达到DNA指纹罔分析要求个何点的PCR鉴定技术虽能用丁这检材的检验，但往往得不到认定的鉴定结沦。本文用辣根酶标记寡接：酸探针数编码小旱MS可变重复序列方法得到了根有毛囊毛发、相y-50,1血液的血痕及40,1唾液(斑)的清晰易读的MVR图谱，按得的可永久保存的数，编码(图1、2、3)可用r个人同一认定。图l血痕DNA的MYRa]谱一维普资讯http://www.cqvip.com法医学杂志1998年2门第14卷第1期羹萋篓塞搴图2单根毛发DNA的MvR图谱囝3唾液DNA的MVR图谱2．2数字编码方法的最低检出量的测定将同一样品DNA的同景(Ing-200ng)进行小同次小卫星MS32数字编码方法检验，通过增加PCR扩增循环次数，lngONA也能得到清晰可辨的前50个数乇}编码，同玖检验仍能得到一致的数编码(圈4)。2-3案件检验1995年某市发生一起奸杀案，现场己被破坏．唯一的现场物证是被害人ll}1遒擦拭物，地公安局提取了阴道擦拭物与1名重嫌疑人的血液，要求进行DNA检验。笔者经过小星MS32数7编码方法分折，☆定了此嫌疑人。后来，该公安局经侦察排队送米另一名嫌疑人，笔者运用小星数编码方法检验，发现此入精子DNA的数字编码与受害入阴道擦拭物巾精子DNA的编码相同，(与同时检测的DNA指纹图结果一致)，认定现场提取的阴道擦拭物巾精斑为其所留(圈5)，从而为此寨的破获提供了商接的科学证据图4小卫星数字鳊码方法的灵敏度测定一需要。微景样品足检验巾经常遇到的检材，其DNA的处理往往足DNA检验的难点。如果使用常规DNA提取方法口I，由于DNA损失最大，检验效果不理想，而用Chelex-100和Microcon处理检材，进行小卫星MS32数字编码检验．获得了很好的效果，提高了方法的灵敏度，解决了微景检材的个人同一认定问题，使得有限物证得到充分利用及有效价值的永久保存。为了获得清晰完整的MVR-PCR图谱，在实际操作巾要注意试剂的配制。引物浓度不^：高，不宜艮期储备。小¨『J星MS32的A型重复住与T重复位序列H存在一个碱基差异，一个碱基的微小差异在DNA扩增时可能产生错配，在图谱巾该有的位置出现强度较弱的“影带’曲OStband)，虽然判读结果时可阻凭带的强度排除其影响，但：