四态MVR—PCR检测河北D1S8基因座遗传多态性

中国譬警彝也CHINJFORENSICMED2006年第21卷第6期短篇报道四态MVR．PCR检测河北D1S8基因座遗传多态性付丽红，姚玉霞，丛斌，裴黎，赵艳梅，李爱强，吴廷春，宋金平，李淑瑾，马春玲(1．河北医科大学法医学系，河北石家庄050017；2．河北省公安厅法医科，河北石家庄050000)【关键词】法医物证学；四态MVR-PCR；DIS8基因座；银染【文献标识码】B【文章编号】1001-5728(2006)06—0356—02D1s8(MS32)基因座是位于人类1号染色体(1q4243)的小卫星(MinisatelliteVariantRepeat，MVR)，由长度为29bp的重复单位串联排列组成。在重复单位的5’端存在两个相邻的碱基替换G—A(SiteI)和C—T(siteII)，Tamaki等⋯根据两个位置碱基替换的不同将D1s8核心序列命名为E、e、Y、Y型，由此设计四种MVR—PCR特异性引物分别针对这四型核心序列，称为四态MVR—PCR技术。本文采用此技术检测了河北汉族群体100名无关个体的D1s8基因座，现报道如下。【基金项目】河北省科技厅科学研究与发展计划(03276196D．12)【作者简介】付丽红(1976一)，女，河北肥乡人，硕士，讲师，主要从事法医物证学研究工作。【通讯作者】丛斌(1957一)，男，山东文登人，博士，教授，主要从事法医分子遗传学及病理生理学研究。1材料与方法100份抗凝血液样品(河北省血液中心提供)，采用酚／氯仿法提取基因组DNA。D1S8基因座引物序列参照KeijiTamaki等¨的文献报道，由北京赛百盛公司合成，序列如下：32一TAG—CA：5TCATGCGTCCATGGTCCGGACAT—TCTGAGTCACCCCTGGCCA332一TAG—CG：5TCA11GCGTCCATGGTCCGGACAT—TCTGAGTCACCCCTGGCCG332一TAG—TA：5TCATGCGTCCATGGTCCGGACAT．TCTGAGTCACCCCTGGTCA332一TAG—TG：5TCATGCGTCCATGGTCCGGACAT—TCTGAGTCACCCCTGGTCG332一D：5CGACTCGCAGATGGAGCAATGGCC3TAG：5TCArI、GCGTCCATGGTCCGGA3每个标本设置四个反应管(E，e，Y，Y)单独扩增。中断后样品的保存条件和保存时间就尤为重要。本文结果显示，室温、避光保存的条件下，在22h内，模板及酶降解并不严重，引物和扩增产物中的荧光物质也能较稳定地保存。这使继续PCR和3100基因分析仪检测产物成为可能。放置至24h，模板大片段降解明显，产生大量短片段峰，使结果不可判读。PCR的“平台期”一般在25次热循环(对一般浓度的模板)以上时才出现J，在此之前，扩增产物仍能随热循环次数的增加而增加(指数期)。故继续PCR应补足热循环次数，使总热循环次数达到或稍超过28次，才能得到理想的产物。也正由于“平台期”，PCR产物在达到一定产量后不再增加，使产物可供3100基因分析仪检测(不至于形成PULL—UP峰)。但是为了保证PCR的忠实性，补加的热循环次数不宜过多。如因为断电等意外导致PCR中断，应根据断电时间大致估计出已进行了多少次热循环(2700型扩增仪每一次完整的热循环需4339，PE公司其它·356·型号扩增仪均在445”左右)，酌量补加热循环次数。综上所述，PCR进程发生中断时，不一定需要重新建立PCR反应体系。至少在22h内，室温、避光条件下保存样品，继续进行PCR并补足一次PCR没有完成的部分，即可等效于一次完整的PCR，可以使扩增产物能正常检测并正确分析，达到最终目的。在公安实战工作中，可以节省样品检测时间和试剂的消耗，对意外、紧急、突发及重大案件提升检案效率有着重大的意义。(本文图片见彩插Ⅳ)【参考文献l[1]郑秀芬．法医DNA分析[M]．北京：中国人民公安大学出版社，2002：112—113．[2]吴梅筠，刘明俊，王保捷，等。法医物证学[M]．第1版。北京：人民卫生出版社．1998：186—190．(收稿日期：2005—11-22；修回13期：2006—01—17)维普资讯http://www.cqvip.com中国墙譬警彝跑CHINJFORENSICMED2006年第21卷第6期25反应体系内含2．510XBufer，1．5mmol／LMsCl2，0．25mmol／LdNTP，引物32D、TAG各1．0p,mol／L，Taq酶1．6U，模板DNA10—100ng，E管、e管、Y管、y管分别加入引物32一TAG—CA、32一TAG—CG、32一TAG—TA、32一TAG—TG10nmol／L。循环参数：95℃4min后，95oC1．3min，67o